Antecedentes: Estudios de citotoxicidad in vivo e in vitro llevado a cabo con adhesivos autograbadores, han encontrado discrepancias con respecto a la toxicidad de estos sobre el tejido pulpar. Objetivo: Evaluar la citotoxicidad de dos adhesivos autograbadores (1 solo paso) sobre células madre mesenquimales de pulpa dental humana, comparado con la citotoxicidad ocasionada por el uso de un sistema adhesivo de quinta generación (2 pasos) utilizando espectroscopía Raman. Materiales y Métodos: Dos sistemas autograbadores: Single bond universal (3M™)” y “Opti bond all in one (Kerr™) fueron utilizados como material experimental y un adhesivo de quinta generación Adper single bond (3M™) fue utilizado como control. Estos fueron aplicados sobre discos de dentina de 1mm de grosor, los cuales fueron insertados en dispositivos y colocados sobre pozos de cultivo de células madre de pulpa dental. Tres diferentes pruebas: Espectroscopía Raman, MTT, y Microscopia de Fluorescencia fueron realizadas para analizar viabilidad celular a las 24 horas de la aplicación de los adhesivos. Resultados: Las pruebas MTT y Fluorescencia arrojaron un porcentaje de viabilidad mayor al 90% para los dos adhesivos autograbadores y una viabilidad menor para el adhesivo de dos pasos, coincidiendo con los resultados de los espectros obtenidos por la técnica Raman. Conclusiones: Las técnicas empleadas permiten concluir que no se aprecian efectos citotóxicos estadísticamente significativos, originados por el uso de adhesivos autograbadores y adhesivos de quinta generación cuando existe una barrera dentinaria de al menos 1 mm de espesor. Adicionalmente, el estudio permitió concluir que la Espectroscopía Raman es una herramienta con un potencial comparable a las pruebas de MTT y Microscopía de fluorescencia para evaluar viabilidad celular.Colciencias