Tesis Doctorado
Caracterización de la expresión génica durante la embriógénesis temprana en plantas: trauco, un gen esencial para el embrión.
Autor
Aquea-Zeballos, José Felipe
Institución
Resumen
La embriogenésis es una etapa muy importante en el ciclo de vida de las
plantas superiores, debido a que es la transición desde un cigoto unicelular hasta
la formación de un individuo completo. A pesar que gimnospermas y
angiospermas se separaron hace más de 300 millones de años, las plantas de
ambos grupos comparten una organización de tejidos similar derivada del plan
básico que se establece durante la embriogénesis. El desarrollo del embrión está
bajo un estricto control genético. Este proceso es regulado por una gran cantidad
de genes que deben funcionar de manera coordinada y organizada. Dentro de la
embriogénesis de plantas superiores, los estados tempranos son claves para el
desarrollo normal del embrión, debido a que en esta etapa se establece el eje
apical-basal y comienzan a diferenciarse los principales tipos de células y tejidos.
A diferencia del gran conocimiento que se tiene acerca de los mecanismos
moleculares y fisiológicos que regulan las etapas finales del desarrollo del
embrión, poco se conoce sobre los mecanismos que participan durante los
estados tempranos de la embriogénesis.
El objetivo principal de esta tesis es la identificación y caracterización de
genes que se expresan durante las etapas tempranas de la embriogénesis en
plantas.
Como modelo de estudio del desarrollo temprano del embrión utilizamos la
embriogénesis somática de Pinus radiata. Mediante cDNA-AFLP realizamos un
análisis global de expresión de tres estados tempranos y la comparamos con
células indiferenciadas. Seleccionamos fragmentos derivados de transcritos que
están inducidos en células embriogénicas. La secuencia de estos fragmentos fue
utilizada para determinar la identidad de cada gen expresado. Treinta y cinco
fragmentos presentan similitud significativa con posibles proteínas o proteínas de
función conocida. Varios de los fragmentos seleccionados son nuevas secuencias
de plantas y no habían sido identificadas previamente, mientras que quince de
estas secuencias pertenecen a genes anotados en el genoma de la planta
modelo Arabidopsis thaliana. Seleccionamos algunos de estos genes y
verificamos su patrón de expresión en los mismos estados de desarrollo.
De los genes que identificamos seleccionamos dos para una caracterización
más en detalle. A partir del fragmento que identificamos determinamos la
secuencia del gen completo al que pertenece y cuantificamos la expresión en
distintos tejidos de la planta. Hemos identificado a PrOTUBAIN como una nueva
deubiquitinasa tipo OTUBAINS. Estas proteínas pertenecen a una familia de
cistein-proteasas descritas recientemente en animales que participan en la vía de
ubiquitina. PrOTUBAIN se expresa en todos los tejidos de la planta, teniendo un
nivel mayor de expresión en embriones. Además, hemos identificado un
homólogo a proteína del grupo trithorax descrito previamente en animales y
levadura. Este grupo de genes está involucrado en el control del desarrollo
mediante el remodelamiento de cromatina. En plantas, este gen se expresa
principalmente durante el desarrollo embrionario. Debido a su posible importancia en la embriogénesis, hemos nombrado TRAUCO a este gen, en alusión al mito
chilote de la fertilidad.
Para determinar la función de TRAUCO en plantas, hemos donado y
caracterizado el gen homólogo de la planta modelo Arabidopsis thaliana.
Utilizando una fusión transcripcional del gen reportero GUS bajo el control del
promotor TRAUCO determinamos que este gen es expresado durante todo el
desarrollo embrionario y en tejidos específicos de la planta tales como anteras,
polen, sépalos, hidátodos y raíz. El patrón de expresión durante la embriogénesis
temprana lo verificamos por hibridación in situ. Mediante análisis genéticos
demostramos que la interrupción de este gen, utilizando la inserción de T-DNA,
causa la detención temprana del desarrollo embrionario en el estado globular.
Estos embriones mutantes presentan patrones aberrantes de división celular.
Nuestros datos sugieren que el gen TRAUCO se ha conservado durante la
evolución y es el primer gen de este tipo descrito como esencial para el desarrollo
embrionario de plantas superiores. PFCHA-Becas Doctor en Ciencias Biológicas Mención Genética Molecular y Microbiología 213p. PFCHA-Becas TERMINADA