Tesis Doctorado
Despliegue y repliegue de peroxidasa y apoperoxidasa de rabano: estudios de fluorescencia intrinseca y dicroismo circular.
Autor
Lasagna-Arias, Mauricio Daniel
Institución
Resumen
En el presente trabajo se estudia el despliegue y repliegue de Peroxidasa de
rábano (HRP) y de su apoenzima (apoHRP). Para ello se utilizó clorhidrato
de guanidina y temperatura como agentes denaturantes. Peroxidasa de
rábano es una hemoglicoproteína de origen vegetal de aproximadamente 40
kD cuya estructura tridimensional aún no ha podido ser dilucidada y que
dentro de su secuencia aminoacídica conformada por 308 residuos
aminoacídicos presenta un solo triptófano (Trp 117), motivo por el cual la
hace bastante atractiva desde el punto de vista espectroscópico. Es por
esto último que se utilizan las técnica de fluorescencia en estado
estacionario, fluorescencia resuelta en el tiempo y dicroismo circular, ya que
ofrecen una oportunidad única de estudiar su dinámica en una forma
altamente sensible y no invasiva.
Los estudios demostraron que existe una alta transferencia de energía entre
el triptófano y el grupo heme de HRP, calculándose una distancia cercana a
1,5 nm entre ellos. Por otro lado se pudo determinar que la denaturación de
HRP mediante GuaHCI obedece a un proceso en dos estados y que es
irreversible. La denaturación de apoHRP al contrario presenta un proceso de
tres estados, completamente reversible y con la presencia de un estado
intermedio termodinámicamente estable a 0751VI de GuaHCI. Este estado
intermedio presenta todas las características del estado Molten Globue. Se
observó además que existiría una alta similitud entre los estados
desplegados de HRP y apoHRP a una alta concentración de GuaHCl.
Los estudios de despliegue/repliegue de HRP en función de la temperatura
indican que el proceso es irreversible y que a altas temperaturas el grupo heme se encontraría alejado de triptofano. Para la apoHRP el proceso de
despliegue/repliegue es reversible. PFCHA-Becas Doctor en Ciencias Mención en Química 154p. PFCHA-Becas TERMINADA