| dc.description | Eschenchia coli productores de toxina Shiga (STEC) constituyen un grupo de
patógenos intestinales emergentes a escala mundial. Las manifestaciones clínicas de
las infecciones producidas por STEC, van desde diarrea acuosa y colitis hemorrágica
(CH), hasta la complicación extraintestinal más grave que es el Síndrome Hemolítico
Urémico (SHU). Dentro de las STEC existe un subgrupo denominado Escherichia coli
enterohemorrágico (ECEH), que tradicionalmente se relacionó con la producción de
infección en el humano. La capacidad de ECEH de producir infecciones en el
hombre, estaría dada principalmente por la síntesis de toxina Shiga y la expresión de
la proteína intimina. La proteína intimina es codificada por el gen eae, el cual se
encuentra ubicado en un islote de patogenicidad llamado LEE (locus para la
destrucción del enterocito). Clásicamente, la presencia del gen eae se consideró un
aspecto fundamental en la infección producida por cepas de ECEH. Sin embargo, el
aislamiento de cepas carentes de este gen y productoras de toxina Shiga (STEC),
desde pacientes humanos con infecciones intestinales, cambió radicalmente esta
línea de pensamiento.
Un aspecto clave para la colonización del intestino y el desarrollo de
enfermedad por STEC, es la capacidad de adherencia a células epiteliales del tracto
gastrointestinal. En este sentido, la expresión de la proteína intimina, permite a las
cepas de ECEH, producir una lesión característica sobre la célula epitelial
denominada AJE (adhesión y destrucción). Durante la formación de la lesión A/E, se
establece una adherencia íntima entre la bacteria y la célula epitelial intestinal, que
deriva en la alteración del citoesqueleto en la célula eucarionte. Hasta ahora, la proteína intimina, es el único factor demostrado como importante en la colonización
intestinal in vivo. No obstante lo anterior, se ha planteado la existencia de factores
de adherencia diferentes de intimina, a raíz del aislamiento de cepas de STEC que
carecen del gen eae, desde pacientes con colitis hemorrágica y Síndrome Hemolítico
Urémico.
En este trabajo se comprobó la hipótesis que cepas STEC eae negativas se
adhieren a células epiteliales mediante factores de adherencia distintos a la proteína
de membrana externa intimina. Se estudiaron tres cepas STEC eae negativas
aisladas de 2 pacientes involucrados en un brote de intoxicación alimentaria y de 1
paciente con colitis hemorrágica. Las cepas fueron seleccionadas por PCR con una
pareja de partidores diseñados contra todas las variantes del gen eae, actualmente
descritas. Posteriormente, se realizó un análisis comparativo de la capacidad de
adherencia a células HEp-2 entre las tres cepas STEC eae negativas y una cepa
control eae positiva (ECEH EDL 933). En este ensayo la cepa STEC 472-1 mostró
una capacidad de adherencia de 1,3 x 105UFC/ml, valor que superó en dos
logaritmos la capacidad de adherencia de ECEH EDL 933. Al estudiar la presencia
de factores de adherencia descritos previamente para E. coli, las tres cepas STEC
eae negativas tenían los genes ¡ha y saa, pero al analizar la expresión, dos de las
cepas STEC eae negativas expresaron ¡ha y saa, mientras que la cepa STEC 472-1
sólo expresó el gen saa. Para comparar globalmente los genomas de las cepas
STEC 472-1 y ECEH EDL 933 y tratar de explicar la mayor adherencia de la cepa
STEC 472-1, se realizó hibridación sustractiva. Esta técnica permitió detectar genes
que se encuentran específicamente en la cepa de prueba (STEC 472-1) y no en la
cepa control (ECEH EDL 933). Como resultado se obtuvo 18 secuencias específicas de la cepa STEC 472-1, 16 de las cuales tuvieron identidad nucleotídica (95%) con
genes del fago ST46 de la familia P4, descrito en Salmonella typhi CT18. Otras dos
secuencias mostraron identidad con secuencias de genes que codifican para
proteínas hipotéticas en E. coli uropatogénica, y con una región del plésmido p0113
de E. coli 011 3:H21. Se procedió a secuenciar una región de hipervariabilidad
(fragmento psu-int), ubicada dentro del fago P4 de 2.293 pb, en la cual existen 5
marcos de lectura abiertos (ORFs) teóricos. Mediante la construcción de mutantes,
se estudió la participación del gen saa y del fragmento psu-int en la adherencia de la
cepa STEC 472-1 a células epiteliales. Los resultados de los ensayos de
adherencia, mostraron que las mutantes STEC 472-lAsaa y STEC 472-1Apsu-int
tuvieron disminución de un logaritmo en la adherencia a células HEp-2, respecto a la
cepa silvestre STEC 472-1.
Los resultados de este trabajo muestran que la cepa STEC 472-1 eae
negativa serogrupo 0125, tiene una capacidad de adherencia dos logaritmos mayor
a la cepa control ECEH eae positiva. Este fenotipo podría estar asociado a genes
específicos de la cepa STEC 472-1, que tienen identidad nucleotídica con genes de
un fago de la familia P4 descrito en Salmonella typhi CT1 8. Dentro del fago P4 existe
una región de hipervariabilidad, que fue secuenciada y en donde existen 5 OREs
teóricos. Las cepas mutantes para los genes saa y fragmento psu-int presentan una
disminución en la adherencia de la cepa STEC 472-1. | |
