Con el objetivo de obtener proteínas secretadas de M. paratuberculosis se evaluaron los medios de cultivo líquido 7H9-OADC (7H9) y Watson-Reid (WR). Ambos medios de cultivo fueron inoculados con una cepa de campo de M. parutuberculosis aislada de una vaca naturalmente infectada por esta bacteria. Se realizaron lecturas semanales y se construyeron las curvas de crecimiento utilizando análisis de regresión no lineal. Los cultivos fueron cosechados a las 4, 6, 8, y 10 semanas de incubación y se obtuvieron los filtrados del cultivo (FC) posterior a la centrifugación y filtración de las células bacterianas. Ambos medios presentaron diferentes patrones de crecimiento. En el medio 7119 a los pocos días de incubación M. paratuberculosis desarrolló un crecimiento con aspecto granular con cúmulos de células bacterianas suspendidas en el caldo, a diferencia del medio WR en el cual se formó una película amarillenta que flotaba en la superficie que después un periodo prolongado de incubación, logró cubrir por completo la superficie del medio. Las proteínas secretadas obtenidas en el medio WR se visualizaron con un mayor número de bandas y fueron inmunodetectad.as más tempranamente que aquellas obtenidas en 7H9. Las proteínas del FC de M. paratuberculosis fueron cosechadas y concentradas por ultracentrifugación y fueron caracterizadas por SDS-PAGE; su antigenicidad fue evaluada a través de inmunodetecciones (werstern biot) utilizando diferentes sueros de animales infectados confirmados por cultivo fecal. La mayoría de las proteínas Inrnunodetectadas fueron dentro del rango de 20-50 kDa. Fue posible observar también un alto grado de variabilidad en los patrones inmunoreactivos entre diferentes animales. La mayoría de las proteínas que reaccionaron con los sueros bovinos fueron de 45, 42, 37, 36, 35, 34, 32 y 25 kDa. Los sueros bovinos con cuadros clínicos y altos eliminadores de bacterias reaccionaron más intensamente y con más proteínas secretadas que otros animales infectados. Las inmuriodetecciones 110 mostraron diferencias cuando lo sueros fueron preadsorhidos con M. phleí, M. scrofulaceum o M. smegmatis. salvo con M. avium donde hubo diferencias Post preadsorción. Inmunodetecciones realizadas con sueros de cabra y oveja mostraron reactividaci con tres proteínas de 32, 33 y 46 kDa, antes y después del tratamiento de preadsorción con M. phlei. Los anticuerpos detectados en el suero de ciervo reaccionaron con un mayor número de proteínas que en el caso de la cabra y la oveja, además de presentar un patrón de reacción similar al del bovino. Estos resultados sugieren que un pool de proteínas secretadas serían buenas candidatas para ser utilizadas como antígenos en ser(xliagnóstico de paratuberculosis en el bovino como también en otras especies rumiantes. Estas proteínas secretadas serían más especificas de M. paratuberculosis lo que haría innecesaria la preadsorción COfl antígenos de M. phlei.PFCHA-BecasDoctor en Ciencias Veterinarias101 p.PFCHA-BecasTERMINADA