Tesis Doctorado
Regulación transcripciónal del transportador equilibrativo de nucleosidos eny 1 por alta d-glucosa en endotelió fetal humano
Autor
Aguayo-Tapia, Claudio
Institución
Resumen
Las células endoteliales de vena umbilical humana (HUVECs) expuestas a
altas concentraciones de O-glucosa (25 mM) muestran una inhibición del transporte
de adenosina asociado con una disminución en el número de transportadores
presentes en la membrana plasmática. Resultados similares fueron observados tanto
en membrana plasmática como en vesículas de membranas aisladas de células
endoteliales cultivadas en presencia de altas concentraciones de O-glucosa.
Utilizando un anticuerpo para hENT1 fue posible determinar que las HUVECs
expresan la proteína hENT1. Además fue posible establecer que células endoteliales
expuestas a alta O-glucosa presentan una disminución en los niveles de la proteína
hENT1 en la membrana celular.
Por otro lado, este estudio ha establecido que los niveles de mRNA para
hENT1 fueron significativamente menores en células endoteliales cultivadas en
presencia de O-glucosa (25 mM) y de forbol 12-miristato 13-acetato (PMA). Los
efectos de O-glucosa y PMA fueron bloqueados por calfostina C y R0-320432
(inhibidores de PKC). De igual manera, hemos determinado que HUVECs expuestas
a PMA y O-glucosa muestran una disminución en la vida media para el mRNA de
hENT1 . Nuestros resultados sugieren que el efecto de O-glucosa y PMA sobre la
expresión de hENT1 estaría asociado con una disminución en la vida media del
mRNA para hENT1 , posiblemente a través de la activación de PKC.
En esta tesis se presentan los primeros análisis del promotor de hENT1.
Nuestros resultados muestran la funcionalidad del promotor y además indican que Oglucosa,
PMA y óxido nítrico modulan la actividad del promotor de hENT1 en células humanas, induciendo un aumento en la actividad del promotor hENT1 en la línea
celular ECV-304.
En resumen, en esta tesis se presentan las primeras evidencias que muestran
la expresión de la proteína hENT1 en células endoteliales humanas y su regulación
por O-glucosa. De igual forma se muestran los primeros resultados experimentos que
demostrarían la regulación post-transcripcional y transcripcional del promotor de
hENT1 por O-glucosa, proteínas kinasa C y óxido nítrico en células endoteliales
humanas. PFCHA-Becas Doctor en Ciencias Biológicas. 315p. PFCHA-Becas TERMINADA