Tesis Doctorado
Inactivación de la glutamil-trna sintetasa 1 de acidithióbacillus ferrooxidans por la oxidación de cisteinas que ligan zinc
Autor
Katz-Zondek, Assaf
Institución
Resumen
Acidithiobacillus ferrooxidans es una bacteria acidófila y quimiolitótrofa que posee
altos niveles de hemo intracelular que varían según el medio de cultivo. Esta bacteria presenta
dos glutamil-tRNA sintetasas (GluRS1 y GluRS2) que participan en la aminoacilación de los
tRNA Glu (GluRS1) y tRNA Gln (GluRS1 y GluRS2) utilizados para la incorporación de
glutamato y glutamina en la traducción de proteínas. Al igual que la mayoría de las bacterias,
A. jerrooxidans también puede utilizar los Glu-tRNA Glu en la síntesis de hemo. Se ha
observado que cuando la bacteria se cultiva en condiciones en que se produce un aumento en
la concentración celular de hemo, la actividad de la GluRS1 disminuye sugiriendo que la
síntesis de hemo se regula a nivel de esta enzima. El hecho que la reducción en la actividad de
la GluRS 1 in vivo se pueda prevenir parcialmente al suplementar el medio de cultivo con
glutatión, sugiere que cambios en el estado redox de la GluRS 1 pudieran estar involucrados en
la regulación de la enzima.
El objetivo de esta tesis es caracterizar a nivel molecular los mecanismos que producen
los cambios observados en la actividad de la GluRS l. Ensayos in vitro muestran que se
requiere concentraciones elevadas de hemo para inhibir a la enzima, lo que sugiere que in vivo
ésta molécula no puede regular por sí sola la actividad de la GluRS l. Como el hemo y algunos
de los intermediarios de su síntesis son capaces de causar estrés oxidativo, se estudió el efecto
de agentes oxidantes sobre la enzima. El H202 inactiva a la GluRS1 mediante la oxidación
reversible de tres de las cuatro cisteínas presentes en la enzima. Mutaciones sitio dirigidas
mostraron que las cisteínas relevantes son parte de un sitio de unión a zn+2
. Se determinó que
la oxidación de la GluRS 1 produce la liberación de este ion. Sin embargo, la pérdida de
actividad es más rápida que la liberación del zn+
2 indicando que ambos procesos son
independientes. Si bien concentraciones bajas de hemina no afectan la actividad de la enzima,
se determinó que la presencia de este tetrapirrol cataliza la inactivación por H20 2 de la
GluRSl. En conjunto, los resultados de esta tesis sugieren que la oxidación de la GluRSl
estimulada por hemina puede ser un mecanismo utilizado para la regulación de la síntesis de
hemo en A. jerrooxidans. PFCHA-Becas Doctor en Ciencias Biomédicas 66p. PFCHA-Becas TERMINADA