Informe Final
CARACTERIZACION A NIVEL MOLECULAR DEL VENENO DE LOXOSCELES LAETA (ARAÑA DE RINCON). OBTENCION DE UN ANTIDOTO ESPECIFICO Y ELABORACION DE UN KIT DIAGNOSTICO PARA DETECCION TEMPRANA DE LA MORDEDURA
Autor
Araya-Rojas, Jorge Enrique
Institución
Resumen
El presente proyecto se realizó un kit de diagnóstico inmunocromatográfico con el propósito de contribuir al diagóstico y manejo de la mordedura de Loxosceles laeta (araña de rincón) en forma temprana y oportuna, para instalar tratamiento de primera línea frente a la acción del veneno de este arácnido. Inicialmente se utilizó anticuerpo spoliclonales que fueron producidos contra el veneno total y contra 3 proteínas recombinantes (LIPLD1 y LIPLD2), los cuales fueron capaces de inhibir la actividad hemolítica y domenecrótica en ensayos in vitro e in vivo en conejos, respectivamente. De igual manera, se produjeron anticuerpos monoclonales contra el veneno total y contra las proteínas recombinantes anteriormente descritas. Estos anticuerpos reconocen en forma específica y con una alta sensibilidad sus antígenos respectivos, e inhiben la actividad hemolítica y dermonecrótica de los componentes del veneno. Finalmente, para el desarrollo del Kit diagnóstico se utilizó anticuerpos monoclonales de alta sensibilidad y especificidad, cuatro de ellos producidos en el Laboratorio de la Universidad de Antofagasta y 1 en el Laboratorio de BiosChile. Los anticuerpos monoclonales ya purificados, reconocieron proteínas del veneno de L. laeta en el rango de 3D, 5 a 35,7 kDa y las proteínas recombinantes LIPLD1 y LIPLD2, que son antígenos constituyentes del veneno de L. laeta. Ensayos preliminares a nivel de laboratorio se llevaron a cabo utilizando el kit prototipo armado inmunocromatográficamente con anticuerpo monocional, utilizando como volumen de muestra mínimo 50 uL y máximo de 100 uL, y como tiempo de lectura mínimo 5 min y máximo de 1 hora con una solución de recolección y transporte de la muestra tamponada a pH 7,5.La sensibilidad se evaluó frente a veneno reciente de L. laeta en un rango de 50 a 0,375 ug/ml, pudiendo el kit detectar en estas condiciones hasta una concentración de 3 ug/ml, mientras que con las proteínas recombinantes PLD-1 y PLD-2 logró detectar hasta una concentración de 0,1 ug/ml. La evaluación de especificidad del kit se realizó frente a veneno de Abeja (Apis emellifera), escorpión azul (Rhopalurus junceus) y de la araña del trigo o viuda negra (Latrodecutus mactans), frente a ninguno de los cuales se observó reacción cruzada. También se evaluó el rendimiento del kit in vivo frente a mordedura experimental de L. laeta mediante su incorporación a un kit inmunocromatográfico para mejorar el diagnóstico y el tratamiento de la mordedura de la araña de rincón L. laeta. Esta línea de trabajo ha generado nuevos conocimientos y líneas de investigación en el ámbito de la salud pública. Generó nuevo conocimiento sobre el veneno de este arácnido y aplicaciones biotecnológicas de alto valor para evitar las complicaciones e incluso la muerte por la mordedura de L. laeta. El mercado para el producto, desarrollado como kit diagnóstico de fácil acceso a todo público, posee un potencial enorme, tanto social como empresarial, pues contribuye a resolver un problema de salud pública y abre oportunidades a las empresas del rubro para invertir y comercializar el paquete tecnológico. Los principales impactos logrados con este proyecto se pueden resumen en: a)Científico-Tecnológico: El uso de anticuerpos monoclonales para fabricar un kit inmunocromatográfico de diagnóstico temporal de la mordedura por L. laeta en personas. Estos anticuerpos además, constituyen el soporte tecnológico para el desarrollo de un antisuero para el tratamiento específico frente al veneno de L. laeta. b)Económico.Social: Comercialización de un kit efectivo para el diagnóstico y manejo del loxoscelimo en salud publica. Se puede mejorar significativamente el tratamiento con el futuro desarrollo del antisuero. c)Institucional: i) Aumento del número de especialistas con formación en aplicación de anticuerpos monoclonales. ii) Potenciamiento de la investigación multidisciplinaria en el área inmunológica-molecular. iii) Aumentar las relaciones investigación-empresas en áreas relevantes de desarrollo. iv) Aumentar la relación con la comunidad resolviendo problemas como los planteados. FONDEF 239 FONDEF