At this study, we attempted to use simple polymerase chain reaction (PCR) to detect hepatitis B virus (HBV) in human blood samples. PCR is a sensitive and specific test for amplifying a sequence of HBV DNA hundreds of times from a small quantity of initial DNA. This test can allow us to visualize DNA in a 2% agarose gel electrophoresis. Samples were collected from 26 patients infected with HBV confirmed by ELISA test to detect antibodies to hepatitis B surface antigen (HBsAg) and e-antigen (HBeAg) and, from 9 volunteers. Results: among 26 patients HBV+, 100% patients were considered positive for surface antigen (HBsAg), 69% were considered positive for e-antigen (HBeAg), and 100% were positive for PCR, showing 447bp bands in agarose gel (2%), Sensibility 100%, Specificity 100%. Conclusion: PCR is a very good alternative to be used in very specific cases such as patients in whom there is uncertainty about the presence of the hepatits virus after doing others test like ELISA.La presente investigación busca implementar la técnica reacción en cadena de la polimerasa (PCR) simple para identificar virus de hepatitis B (VHB). Gracias a su alta sensibilidad y especificidad, la PCR puede amplificar una región específica del genoma del virus cientos de veces a partir de muy poco ADN inicial y, de esta forma, visualizarlo por medio de bandas electroforéticas en geles de agarosa. Se tomaron muestras sanguíneas de 26 pacientes y 9 voluntarios en la Ciudad de Quito. En todas las muestras de estos pacientes, además de las pruebas de PCR se realizaron también pruebas de antígeno de superficie y antígeno de envoltura del virus por ELISA como medio de diagnóstico de hepatitis B. Durante el desarrollo de la investigación se evidenció que de los 26 pacientes, el 100 % resultaron positivos para hepatitis B, el 100 % resultó positivo a la prueba de ELISA para antígeno de superficie, el 69% resultó positivo para antígeno e (HBeAg), el 100% resultó positivo en PCR, presentando una banda de 447pb en gel de agarosa al 2%, valor predictivo positivo 1, valor predictivo negativo 1, sensibilidad 100% y especificidad 100%. En base a las observaciones realizadas y las pruebas desarrolladas se evidenció que el uso del PCR para el diagnóstico de hepatitis B es una alternativa válida en casos específicos de pacientes en quienes no se puede descartar por completo la presencia del virus por otro tipo de pruebas como el ELISA.