Introdução: O objetivo deste estudo foi confirmar a identificação de amostras clínicas e alimentos de Enterococcus gallinarum e Enterococcus casseliflavus por PCR-RFLP. Métodos: Cinquenta e duas cepas identificadas por exames bioquímicos convencionais foram submetidos a amplificação por PCR e digestão com HinfI. Apenas 20 (38,5%) das 52 amostras apresentaram um padrão de DNA esperado E. gallinarum e E. casseliflavus. Resultados: Analise dos resultados deste estudo demonstraram que, algumas vezes E. gallinarum e E. casseliflavus são erroneamente identificados e confirmaram a potencial aplicação da análise do 16S rDNA para identificação exata destas espécies. Conclusões: A correta identificação é importante a fim de distinguir entre resistência intrínseca e adquirida à vancomicina.Introduction: This study aimed to confirm the identification of Enterococcus gallinarum and Enterococcus casseliflavus isolated from clinical and food samples by PCR-RFLP. Methods: Fifty-two strains identified by conventional biochemical exams were submitted to PCR amplification and digested with HinfI. Only 20 (38.5%) of the 52 strains showed a DNA pattern expected for E. gallinarum and E. casseliflavus. Results: Analysis of the results of this study showed that E. gallinarum and E. casseliflavus are occasionally erroneously identified and confirmed the potential application of 16S rDNA analysis for accurate identification of these species. Conclusions: A correct identification is important to distinguish between intrinsic and acquired vancomycin resistance.