Anthracnose is a disease caused by several species of the genus Colletotrichum on different hosts. C. acutatum and C. gloeosporioides are 2 morphologically similar species that can cause similar disease symptoms on the same host. A total of 220 isolates of Colletotrichum species were collected from typical anthracnose lesions on leatherleaf fern (Rumohra adiantiformis), Key lime (Citrus aurantifolia), starfruit (Averrhoa carambola), papaya (Carica papaya) and mango (Mangifera indica) in Costa Rica and Florida. Isolates were characterized by colony morphology, benomyl sensitivity and PCR with specific primers for C. acutatum and C. gloeosporioides CaInt2 and Cg/fInt1, respectively. Of the 85 isolates obtained from mango, all 33 isolates from Florida were identified as C. acutatum, whereas all isolates from Costa Rica were C. gloeosporioides. Out of 60 isolates obtained from starfruit, 3 isolates from Costa Rica were C. acutatum (first report) and the rest were C. gloosporioides. All isolates from leatherleaf fern (25 isolates) and Key lime (25 isolates) were identified as C. acutatum. All remaining isolates from startfruit and mango, as well as all isolates from papaya, were C. gloeosporioides. There was no symptom difference between both Colletotrichum species on those hosts were both species were found.La antracnosis es una enfermedad causada por varias especies del género Colletotrichum en diferentes hospederos. C. acutatum y C. gloeosporioides son especies morfológicamente similares, que pueden causar síntomas similares en el mismo hospedero. Se colectaron 220 aislamientos de Colletotrichum de muestras con síntomas típicos de antracnosis en helecho hoja de cuero (Rumohra adiantiformis), limón criollo (Citrus aurantifolia), carambola (Averrhoa carambola), papaya (Carica papaya) y mango (Mangifera indica) en Costa Rica y Florida, Estados Unidos. Los aislamientos se caracterizaron por morfología de colonia, sensibilidad al benomil, y PCR con los iniciadores específicos para C. acutatum y C. gloeosporioides CaInt2 y Cg/fInt1, respectivamente; también se analizó la morfología de las colonias de ambas especies. De los 85 aislamientos obtenidos de mango, todos los aislamientos de Florida fueron identificados como C. acutatum, mientras que todos los aislamientos de Costa Rica fueron C. gloeosporioides. De los 60 aislamientos de carambola, 3 provenientes de Costa Rica fueron C. acutatum (primer informe) y el resto fueron C. gloeosporioides. Todos los aislamientos de helecho hoja de cuero (25 aislamientos) y de limón criollo (25 aislamientos) se identificaron como C. acutatum. Los demás aislamientos de carambola y mango así como todos los aislamientos de papaya, se identificaron como C. gloeosporioides. No se encontró diferenciación de síntomas entre ambas especies sobre los hospederos donde se encontraron.