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Evaluación de la colonización de Bacillus subtilis LPM1 mediante un marcador fluorescente en raíces de tomate (Solanum lycopersicum cv. Micro-Tom) a nivel in vitro e in planta
Autor
MONICA HERNANDEZ RODRIGUEZ
Resumen
Hay muchos reportes de investigaciones que han comprobado que existe una relación
de sinergismo entre plantas y microorganismos. Estos organismos asociados al rizoplano
son comúnmente identificados como (PGPR), del inglés Plant Growth-Promoting
Rhizobacteria y se encuentran presentes en la rizósfera; en las áreas internas de la raíz
y el cuerpo de la planta. Para evaluar los patrones de colonización por PGPR en las
raíces, se han realizado diferentes estudios que han involucrado transformaciones
genéticas con gen GFP (Green Fluorescent Protein) o sondas mediante la técnica de
FISH y CARD-FISH (Fluorescent In situ Hybridization), la desventaja de estas técnicas
en algunos casos es la baja intensidad de fluorescencia, así como la inversión de tiempo
en la transformación. Otra técnica para evaluar colonización bacteriana se basa en el
análisis en tiempo real (qPCR), sin embargo, ésta no es capaz de determinar los patrones
espaciales de colonización, solo la presencia y/o abundancia. El presente estudio se
enfocó en evaluar una molécula fluorescente que permitiera la detección de bacterias
mediante fluorescencia por tinción, el cual, es un método novedoso que representa una
estrategia factible y de diagnóstico rápido, lo que constituye a su vez una herramienta
valiosa para la detección precisa de patrones de colonización en la rizósfera. A este
respecto, se sintetizó una serie de sales de sodio de pírenos partiendo de la molécula 8hidroxipireno1-3-6-trisulfonato
de sodio, portadores de cadenas alifáticas con
terminaciones alquílicas, con ácido carboxílico, ácido málico, etinileno como marcadores
fluorescentes para estudiar e identificar los patrones de colonización de la bacteria
Bacillus subtilis LPM1 en raíces de plantas de 3 variedades de tomate (Floradade, MicroTom
y
Silvestre),
tanto
a
nivel
in
planta
en
una
variedad
(Micro-Tom),
como
a
nivel
in
vitro
mediante
técnicas espectroscópicas y microscópicas de fluorescencia como UV-Vis,
fluorescencia y microscopia de barrido láser confocal. Adicionalmente se logró comprobar
la promoción de crecimiento por parte de la cepa Bacillus subtilis LPM1 en los parámetros
biométricos evaluados en las variedades Micro-Tom y Silvestre.