La obesidad es una enfermedad de alta prevalencia en México y a nivel mundial que se caracteriza por el aumento de tejido adiposo provocando daños en el organismo. La farmacoterapia contra este padecimiento es escasa por ello se han estudiado fitoquímicos que pueden afectar la adipogénesis; como el resveratrol (RES), compuesto polifenólico presente en algunas plantas y frutos como: arándanos, uvas, moras, etc. El RES ha demostrado inhibir la lipogénesis y la diferenciación de adipocitos. El conocimiento de diferenciación del adipocito es esencial para comprender la obesidad. Proceso que se ha estudiado ampliamente en la línea celular 3T3-L1 en modelos de cultivo celular bidimensionales (2D) en forma de monocapa. Sin embargo, éste no logra imitar el microambiente nativo tridimensional (3D). Por tanto, en el presente trabajo se evalúo el efecto en la viabilidad de preadipocitos 3T3-L1 cultivados en monocapa (2D) y esferoides (3D) con nanopartículas de quitosano cargadas con resveratrol (NPs-QR) y tratadas con lisina (NPs-QRL). Además, la capacidad del quitosano como nanoportador de resveratrol. Se logró sintetizar nanopartículas (NPs-QR) con morfología esférica. En solución las NPs-QR presentaron un diámetro hidrodinámico de 295 ±332 nm, con un potencial zeta de 34 ±9 mV; mientras que para las NPs-QRL fue de 944 ±98 nm y 17 ±4 mV, respectivamente. Las NPs presentaron una eficiencia de encapsulamiento del RES del 92%. Posteriormente, el porcentaje de liberación de RES para las NPs-QRL en condiciones fisiológicas simuladas, fue del 100% en fluido gástrico y un 29% en fluido intestinal. Se estableció un método para la cuantificación de quitosano en la suspensión de nanopartículas por medio de cromatografía líquida de alta resolución (HPLC). Por otro lado, las NPs-QR y NPs-QRL exhibieron una concentración media inhibitoria (IC50) para los preadipocitos 3T3-L1 en 2D de 118 ±12 y 112 ±13 µg/mL y en 3D de 26 ±11 y 71 ±16 µg/mL, respectivamente. La citotoxicidad de las NPs también fue evaluada en hepatocitos de la línea celular AML-12. Por tanto, nuestros resultados demuestran la capacidad del quitosano como nanoportador y la capacidad del RES como agente citotóxico.Obesity is a highly prevalent disease in Mexico and is worldwide is characterized by increased adipose tissue, causing health problems. Pharmacotherapy against this condition is scarce; therefore, phytochemicals that can affect adipogenesis have been studied, such as resveratrol (RES), a polyphenolic compound in some plants and fruits such as blueberries, grapes, and blackberries, among others. RES has been shown to inhibit lipogenesis and adipocyte differentiation. Knowledge of adipocyte differentiation is essential to understanding obesity. This process has been extensively studied in the 3T3-L1 cell line in two-dimensional (2D) cell culture models in monolayer form, but this fails to mimic the native three-dimensional (3D) microenvironment. Therefore, in the present work, we evaluated the effect of chitosan nanoparticles loaded with resveratrol (NPs-QR) and treated with lysine (NPs- QRL) on the viability of preadipocytes cultured in monolayer (2D) and spheroids (3D) of 3T3-L1 cells. In addition, the capacity of chitosan as a resveratrol nanocarrier. It was possible to synthesize nanoparticles (NPs-QR) with spherical morphology. In solution, the NPs-QR presented a hydrodynamic diameter of 295 ±332 nm, with a zeta potential of 34 ±9 mV, while for the NPs-QRL, it was 944 ±98 nm and 17 ±4 mV, respectively. The NPs presented a RES encapsulation efficiency of 92%. Subsequently, the percentage of RES release for NPs-QRL under simulated physiological conditions was 100% in gastric fluid and 29% in intestinal fluid. A method has been established to determine the chitosan concentration in the nanoparticle suspension using high-performance liquid chromatography (HPLC). On the other hand, NPs-QR and NPs-QRL exhibited a mean inhibitory concentration (IC50) for 3T3-L1 of 118 ±12 and 112 ±13 µg/mL in 2D and 26 ±11 and 71 ±16 µg/mL in 3Drespectively. The cytotoxicity of the NPs was compared with the AML-12 cell line. Therefore, our results demonstrate the capacity of chitosan as a nanocarrier and the capacity of RES as a cytotoxic agent.