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Effect of adding ascorbic acid to the vitrification medium of bovine preantral follicles
Efecto de adicionar ácido ascórbico al medio de vitrificación de folículos preantrales bovinos
Registro en:
10.15381/rivep.v34i2.25100
Autor
Carrascal-Triana, Erly L.
Rodríguez Jimenez, Carolina
Penitente-Filho, Jurandy
Luiza de Azevedo, Jovana
da Silveira Deminicis, Renata Gomes
Alves Torres, Ciro A.
Institución
Resumen
The aim of this study was to evaluate the effect of adding ascorbic acid (AA) to the vitrification medium of bovine preantral follicles (PFs) subjected previously to cooling at 4 °C for 4 h or 24 h. Ovaries were collected from Nelore heifers at 14 months of age. In the laboratory, ovarian fragments were removed from the cortical region and distributed to fragments as fresh control (C0h), and fragments to cooling at 4 ºC for 4 and 24 hours in TCM-199 plus HEPES and antibiotics. Of the cooled fragments, two were fixed as controls for each cooling time (C4h, C24h), and the remaining fragments were distributed in four vitrification treatments, using the TCM-199 medium associated with ethylene glycol and dimethyl sulfoxide (V), sucrose (VSUC) or ascorbic acid (VAA), and the treatment with ethylene glycol, dimethyl sulfoxide, sucrose and AA (VSUC+AA). After 72 h, fragments were warmed and fixed for histological analysis and mechanical follicular isolation. No difference (p>0.05) between C0h and C4h for morphologically normal PFs was detected (99.3 and 96.0%, respectively). Vitrification reduced the morphological integrity and follicular viability in all treatments compared to C0h; nevertheless, VAA treatment maintained the follicular viability like C24h (p>0.05). It is concluded that bovine PFs were conserved efficiently at 4 °C during 4 h, and the addition of ascorbic acid to the vitrification medium improved survival rates and kept the morphological integrity of the follicles. El objetivo del estudio fue evaluar el efecto de la adición de ácido ascórbico (AA) al medio de vitrificación de folículos preantrales (FPs) bovinos previamente enfriados a 4 °C durante 4 o 24 h. Se recolectaron ovarios de novillas Nelore a los 14 meses de edad. En el laboratorio se extrajeron fragmentos de ovario de la región cortical y se distribuyeron a fragmentos para control fresco (C0h), y fragmentos para refrigeración a 4 ºC por 4 y 24 horas en TCM-199 más HEPES y antibióticos. De los fragmentos enfriados, dos se fijaron como controles para cada tiempo de enfriamiento (C4h, C24h), y los restantes se distribuyeron en cuatro tratamientos de vitrificación, utilizando el medio TCM-199 asociado con etilenglicol y dimetilsulfóxido (V), sacarosa (VSUC) o ácido ascórbico (VAA), y el tratamiento con etilenglicol, dimetilsulfóxido, sacarosa y AA (VSUC+AA). Después de 72 h, los fragmentos se calentaron y fijaron para el análisis histológico y el aislamiento folicular mecánico. No se detectó diferencia (p>0.05) entre C0h y C4h para FPs morfológicamente normales (99.3 y 96.0%, respectivamente). La vitrificación redujo la integridad morfológica y la viabilidad folicular en todos los tratamientos en comparación con C0h; sin embargo, el tratamiento VAA mantuvo la viabilidad folicular similar a C24h (p>0.05). Se concluye que los FAs bovinos se conservaron eficientemente a 4 °C durante 4 h, y la adición de ácido ascórbico al medio de vitrificación mejoró las tasas de supervivencia y mantuvo la integridad morfológica folicular.