The present study aimed to determine the conception rate at first service and the birth rate, as well as the percentage of female calves born using Gyr sexed semen in Holstein cows. Artificial insemination (AI) was performed on 1174 second and third calving cows during December 2011 to October 2012 in small-scale farms of the Majes Irrigation, Arequipa, Peru. The AI was carried out 12 hours after the visual detection of heat and the pregnancy diagnosis was done by rectal palpation 45-60 days after the service. The conception rate in 2nd calving animals was in a range of 37 to 77%, while for 3rd calving animals it was in the range of 39 to 88%. The birth rate was in the range of 32 to 71% and 38 to 85% for cows of 2nd and 3rd calving, respectively, without evidence of an effect of seasonality on the conception rate or birth rate. The overall conception rate was 56% and the birth rate was 54%. The percentage of female calves was 82% and male calves 18%. It is concluded that the number of births and seasonality do not influence conception and birth rates when using Gyr sexed semen; likewise, the use of Gyr sexed semen in Holstein cows would be a good reproductive option.El presente trabajo tuvo como objetivo determinar la tasa de concepción al primer servicio y la tasa de natalidad, así como el porcentaje de terneros hembra nacidas usando semen sexado Gyr en vacas Holstein. Se realizó la inseminación artificial (IA) a 1174 vacas de segundo y tercer parto durante los meses de diciembre de 2011 a octubre de 2012 en ganaderías de pequeña escala de la Irrigación Majes, Arequipa, Perú. La IA llevó a cabo 12 horas después de la detección visual del celo y el diagnóstico de preñez se realizó mediante palpación rectal a los 45-60 días del servicio. La tasa de concepción en animales de 2do parto se encontró en un rango de 37 a 77 %, mientras que para los animales de 3er parto fue de 39 a 88%. La natalidad estuvo en el rango de 32 a 71% y de 38 a 85% para vacas de 2do y 3er parto, respectivamente, sin que se evidencie un efecto de estacionalidad sobre la tasa de concepción o de la natalidad. La tasa de concepción global fue de 56% y la de natalidad de 54%. El porcentaje de terneras obtenidas fue de 82% y de terneros de 18%. Se concluye que el número de partos y la estacionalidad no influyen sobre las tasas de concepción y de natalidad cuando se emplea semen sexado Gyr; asimismo, el uso de semen sexado Gyr en vacas Holstein sería una buena opción reproductiva.