The objective of the study was to evaluate the timing of adding glycerol during thecooling process on sperm quality of canine semen. Fifteen ejaculates from 4 mature dogswere used. Each sample was divided in aliquots and three methods of adding glycerolwere used (T1: at the beginning; T2; at the beginning and at the end; T3: at the end of thecooling process). Semen samples were packed in 0.5 ml straws and frozen in liquid nitrogen.The post-thawing progressive motility and the functional integrity of membrane wereevaluated. None statistical difference was observed due to the three treatments, indicatingthat the process of cryopreservation can be simplified by adding all the glycerol at thebeginning of the cooling curve.El objetivo del presente trabajo fue evaluar el efecto del momento de adición del glicerol durante el proceso de enfriamiento sobre la calidad espermática del semen canino. Se utilizaron 15 eyaculados de 4 perros adultos. Cada muestra de semen fue dividida en alícuotas para someterlas a tres métodos de adición de glicerol (T1: al inicio; T2: al inicio y final; T3: al final de la curva de enfriamiento). El semen se envasó en pajillas de 0.5 ml y se congeló en nitrógeno líquido. Se evaluó la motilidad progresiva y la integridad funcional de membrana posdescongelamiento. No se encontró diferencia estadística entre los tres métodos de adición del glicerol, pudiéndose simplificar el proceso de criopreservación al añadir todo el glicerol al inicio de la curva de enfriamiento.