Líneas celulares de Rosmarinus officinalis L.: Caracterización química y actividad antiproliferativa sobre la línea celular HT-29

Abstract

RESUMEN: Rosmarinus officinalis L. (romero) es una planta medicinal que biosintetiza compuestos de interés para la industria farmacéutica, cosmética y alimentaria. Se ha reportado que los extractos de Rosmarinus officinalis tienen actividad antioxidante, antiinflamatoria, antibacteriana y anticancerígena. Los compuestos bioactivos mayoritarios en esta especie son el ácido rosmarínico, ácido carnósico y carnosol. El objetivo de este trabajo fue identificar el perfil químico de líneas celulares de Rosmarinus officinalis y evaluar la actividad antiproliferativa sobre la línea celular de cáncer colorrectal HT-29. Se seleccionaron líneas celulares de Rosmarinus officinalis, a partir de un cultivo de células desdiferenciadas en medio MS suplementado con 6-benzilaminopurina (2 mg/L) y ácido 2, 4 diclorofenoxiacético (2 mg/L). Se obtuvieron extractos etanólicos y se analizó el perfil químico mediante cromatografía en capa fina, cromatografía de líquidos de ultra alta resolución acoplado a espectrometría de masas y cromatografía de gases acoplado a espectrometría de masas. Se evaluó la actividad antiproliferativa de los extractos sobre la línea celular HT-29 mediante MTT. Se estableció el cultivo de tres líneas celulares: verde (RoG), blanca (RoW) y amarilla (RoY). Se identificaron 39 compuestos: 23 se encuentran en las tres líneas celulares, en RoG se detectaron 35 compuestos y la mayor cantidad de compuestos fenólicos, fue la única en la que se identificó β-caroteno y el isómero de zeaxantina; en RoW se identificaron 28 compuestos, fue la única en la que se identificaron estigmasterol y carnosol quinona; en RoY se identificaron 33 compuestos y fue la única con zeaxantina. Solo el extracto de RoW mostró disminución de la viabilidad celular de la línea HT-29 a una concentración de 40 μg/mL de 64% a las 24 h y 53% a las 48 h. Se determinó la IC50 de 49.63 μg/mL a las 48 h. Se logró caracterizar el perfil químico de líneas celulares de Rosmarinus officinalis y establecer su relación con la actividad antiproliferativa. ABSTRACT: Rosmarinus officinalis L. (rosemary) is an aromatic medicinal plant that synthesizes compounds of interest for pharmaceutical, cosmetic and food industry. Antioxidant, anti-inflammatory, antibacterial and anticancer activity have been reported from rosemary extracts. The major bioactive compounds identified in this species are rosmarinic acid, carnosic acid and carnosol. The aim of this work was to identify the chemical profile of Rosmarinus officinalis cell lines and to evaluate their antiproliferative activity on colorectal cancer cell line (HT-29). Rosmarinus officinalis cell lines were selected from a culture of dedifferentiated cells on MS medium supplemented with 6-benzylaminopurine (2 mg/L) and 2, 4-dichlorophenoxyacetic acid (2 mg/L). Ethanolic extracts were obtained and analyzed by thin layer chromatography (TLC and HPTLC), ultra-high resolution liquid chromatography coupled to mass spectrometry (UHPLC-MS/MS) and gas chromatography coupled to mass spectrometry (GC-MS). Antiproliferative activity of the Rosmarinus officinalis cell lines extracts was evaluated on the HT-29 cell line by MTT. The culture of three cell lines was established: green (RoG), white (RoW) and yellow (RoY). Thirty-nine compounds were identified, 23 were found in the three cell lines, in RoG 35 compounds were detected and the greatest amount of phenolic compounds, this cell line was the only in which β-carotene and the zeaxanthin isomer were identified. In RoW 28 compounds were identified, it was the only one in which stigmasterol and carnosol quinone were identified. In RoY 33 compounds were identified and it was the only one with zeaxanthin. Only the RoW extract showed a decrease in the HT-29 cell line viability at a concentration of 40 μg/mL of 64% at 24 h and 53% at 48 h. The IC50 of 49.63 μg/mL was determined at 48 h. It was possible to characterize the chemical profile of Rosmarinus officinalis cell lines and establish their relationship with antiproliferative activity.