Tesis
Participación de la proteína ptb en la replicación de astrovirus 8
Fecha
2013-03-06Registro en:
Vélez Uriza, Dora Emma. (2012). Participación de la proteína ptb en la replicación de astrovirus 8 (Maestría en Ciencias en Biomedicina Molecular). Instituto Politécnico Nacional, Sección de Estudios de Posgrado e Investigación, Escuela Nacional de Medicina y Homeopatía, México.
Autor
Vélez Uriza, Dora Emma
Institución
Resumen
RESUMEN: Los astrovirus son virus pequeños, desnudos de entre 28-41 nm, su genoma es de RNA de cadena sencilla de polaridad positiva (RNAcs+) de aproximadamente 7kb, organizado en tres marcos de lectura abiertos (ORF1a, ORF1b y ORF2). Contiene dos regiones no traducidas (RNTs), localizadas en los extremos 5’ y 3’. Diversos estudios han reportado la interacción de proteínas celulares y virales con las RNTs de los virus de RNAcs+, participando en diversas funciones virales. PTB, proteína chaperona del RNA implicada en el metabolismo de éste, es una de ellas. Al respecto, se ha reportado que PTB participa de manera importante en la replicación y traducción de virus de RNAcs+, como Dengue o Calicivirus felino. Antecedentes de nuestro grupo predijeron un sitio de unión para PTB en la RNT 3’ de HAstV-8 y mostraron su presencia en complejos RNA- proteínas, por lo que decidimos analizar la participación de PTB en la replicación de éste. Para ello, se transfectaron células CaCo-2 con un siRNA específico para PTB y un siRNA irrelevante; 72 horas post-transfección las células se infectaron con HAstV-8 y 15 horas y media post-infección se recuperó el sobrenadante, el cual se tituló para evaluar la producción de virus. Los resultados mostraron una disminución en los títulos virales en las células que fueron transfectadas con dos concentraciones del siRNA para PTB en comparación con el título viral obtenido con las células control transfectadas con el siRNA irrelevante. Este resultado se corroboro mediante inmunofluorescencia observándose la perdida de la señal fluorescente de PTB en las células infectadas y transfectadas con el siRNA para PTB. Estos resultados, sugieren la posible participación de PTB en el ciclo replicativo de HAstV-8. ABSTRACT: Human Astrovirus (HAstVs) are single-stranded positive RNA virus (ssRNA+), which includes 5’ and 3’ untranslated region (UTRs). Very little are known about the participation of these regions in astrovirus replication. Several studies described the interaction of the viral UTRs with cellular and viral proteins. PTB function as a RNA chaperone and it has been reported that PTB participate in the replication and translation of several ssRNA+ viruses. Previous results our group, showed a putative binding site for the PTB in HAstV-8 3' UTR and the presence of PTB was detected in RNA-protein complexes from infected CaCo2 cells. To explore the participation of PTB in HAstV-8 viral replication, we using RNA interference and the siRNA- mediated knockdown of PTB resulted in a reduction in virus titers on transfected and infected CaCo2 cells. Moreover, to corroborate these results, the immunofluorescence assay was carried out and the PTB signal was observed diminished only in the CaCo2 cells transfected with PTB-specific siRNAs. These results suggest the possible involvement of PTB in the replicative cycle of HAstV-8.