El papel de la infección y de la proteína NS1 en la modulación del MHC y citocinas relevantes en la respuesta al virus del dengue en cultivos celulares

Abstract

RESUMEN: La proteína NS1 del virus del dengue no forma parte de la partícula viral infecciosa y contiene dos sitios de glicosilación. Esta proteína presenta además tres isoformas: la forma asociada a la membrana (mNS1), la secretada (sNS1) y la intracelular (iNS1). Se ha encontrado que los niveles altos de sNS1 en el suero de individuos virémicos (de hasta 50 mg/mL) condicionan casos de fiebre hemorrágica por dengue. La respuesta inmune contra la infección viral involucra la activación de linfocitos B, NK, células dendríticas y macrófagos, así como la producción de citocinas tales como: IL-1?, IL-6, IL-8, IL-10, IL-18, IFNs y TNF-?. La concentración de varias de estas citocinas correlaciona con la severidad de la enfermedad. En este proyecto se investigó el papel que la proteína sNS1 tiene en la modulación de la respuesta inmune durante la infección con el virus del dengue en cultivos de células humanas de origen monocítico (THP-1). Para alcanzar el objetivo de este trabajo, inicialmente se procedió a la purificación de la proteína sNS1 recombinante (rsNS1) para posteriormente examinar su efecto sobre laexpresión de moléculas de MHC-I y II, de IFN tipo I y II y de citocinas relevantes en células THP-1 bajo diferentes tratamientos. Las cinéticas de los tratamientos analizados en las células THP-1 fueron: sin tratamiento, tratadas con rsNS1 sola, infectadas con VDEN-2 y pretratadas con rsNS1 e infectadas con VDEN-2. Las cinéticas revelaron que la expresión de MHC-I disminuye en todos los grupos experimentales, por otro lado, la expresión de moléculas del MHC-II no se observó disminuida a ningún tiempo de los tratamientos, excepto en la infección viral que causó un aumento considerable en estas moléculas a los 3 días. Se evidenció un aumento de IFN-? e IFN-? endógeno en las células THP-1 a tiempos tempranos relacionado con la proteína rsNS1. Se observó un aumento en la producción de IL-1?, IL-2, IL-4 and IL-6 durante la infección con VDEN-2 y en IL-4 e IL-6 en las células pretratadas con srNS1 a tiempos tempranos. Estos resultados muestran que la proteína sNS1 modula parcialmente la respuesta inmune de las células THP-1. Sorprendentemente, durante la infección experimental por VDEN-2, la proteína NS1 viral fue encontrada en el núcleo por inmunofluorescencia indirecta, este resultado fue confirmado por ensayos de fraccionamiento celular e inmunoprecipitación. Aunque no sólo la proteína viral NS1 sino también la rsNS1 (recombinante) es interiorizada al núcleo y su función allí deberá establecerse en estudios futuros. Nuestros resultados sugieren un papel central de la proteína viral sNS1 en la expresión del MHC-I, IFN-?, IFN-?, IL-4 and en las células THP-1 de origen monocítico humano.