Tesis
Producción de pseudotipos retrovirales portadores de la hemaglutinina de virus de la influenza A y su aplicación en ensayos de neutralización
Fecha
15/06/2012Registro en:
Sandoval Rodríguez, Francisco Ernesto. (2011). Producción de pseudotipos retrovirales portadores de la hemaglutinina de virus de la influenza A y su aplicación en ensayos de neutralización. (Maestría en Biomedicina y Biotecnología Molecular). Instituto Politécnico Nacional, Sección de Estudios de Posgrado e Investigación, Escuela Nacional de Ciencias Biológicas, México.
Autor
Sandoval Rodríguez, Francisco Ernesto
Institución
Resumen
RESUMEN: El virus de la influenza A pertenece a la Familia Orthomixoviridae, es un virus envuelto cuyo material genético es RNA monocatenario, segmentado y de polaridad negativa. La tipificación de este virus es por medio de dos glicoproteínas de superficie: la hemaglutinina (HA) y la neuraminidasa (NA). La HA media la entrada del virus a la célula huésped, y debido a que es el antígeno principal para la protección por anticuerpos (Rothbarth et al., 1999), es el componente principal de las vacunas contra influenza, cuya eficacia se evalúa determinando la capacidad de los anticuerpos inducidos de neutralizar al virus (He et al.,2008). Nuestro grupo de trabajo está enfocado al desarrollo de una técnica serológica la cual no requiere niveles elevados de bioseguridad. Por lo que estamos implementando el uso de los pseudotipos retrovirales que expresen la HA de la influenza A desarrollados por Wang y colaboradores 2008. En este trabajo se produjeron los pseudotipos del virus de la influenza A que expresan las hemaglutininas de los subtipos H3(Aichi, Wyo) , H5(VN, Ind) y H1(SI, PR), incluyendo el subtipo del virus de la influenza pandémica (CACo) 2009. Los pseudotipos del subtipo de la influenza pandémica y los demás subtipos (H1, H3 y H5) se desarrollaron con el sistema reportero HA-?gal, los cuales fueron usados en ensayos de neutralización de anticuerpos y como refuerzo para obtener anticuerpos anti-HA en sueros de conejo. Después de la cuantificación de los pseudotipos del sistema HA-?gal se determinó su capacidad infectiva. Encontrando que nuestros pseudotipos presentan una capacidad infectiva mayor a los pseudotipos desarrollados por Wang y colaboradores en el 2010. Para los pseudotipos del subtipo de la cepa pandémica se obtuvo alta capacidad infectiva debido a la estabilidad proporcionada por la proteína M2 del propio virus (Wang et al., 2010b). Un lote de cada uno de los pseudotipos se purificó y se usó para inmunizar conejos. El esquema de inmunización
consistió en una primera dosis de plásmido que codifica para cada subtipo; después de 15 días se realizó un refuerzo con pseudotipos retrovirales de cada subtipo y después de otros 15 días se realizó un segundo refuerzo con otra dosis de pseudotipos retrovirales. Finalmente se extrajo la sangre por punción cardiaca y se obtuvo el suero, el cual fue inactivado y se uso en un ensayo de neutralización. Encontrado de forma preliminar anticuerpos neutralizantes en los sueros de los conejos inmunizados. Los pseudotipos que expresan la HA de la influenza A son una valiosa herramienta por ser seguros, específicos y versátiles para que sean usados en los ensayos de neutralización. Ya que no requieren niveles elevados de bioseguridad además tienen múltiples aplicaciones como en el diagnóstico, evaluación de fármacos y vacunas.