Clonación de genes que codifican para enzimas proteolíticas de Bromelia hemisphaerica

Abstract

RESUMEN: Se conoce como hemisfericina a la enzima proteolíticas presente en planta Bromelia hemisphaerica, y ha sido descrita como una proteasa cisteínicas. Estudios reportan diferentes puntos isoeléctricos para la enzima, lo cual implicaría la presencia de diferentes isoformas de hemisfericina. Se obtuvo el extracto del fruto de Bromelia hemisphaerica, el cual fue recolectado en el Estado de Morelos, México, y a partir de este fruto se aisló el RNA total de la planta. Se aislaron clonas de la proteasa cisteínicas de la planta, utilizando iniciadores específicos sintetizados en base a regiones conservadas de secuencias conocidas de proteasas cisteínicas de origen vegetal. El inserto, que correspondería al gen que codifica para hemisfericina, tiene 479 pares de bases y contiene una región, que corresponde al sitio activo donde se encuentra el residuo His, y que presenta homología con cisteín proteasas ya conocidas de otras plantas. El análisis bioestadístico reveló que la secuencia BhCP presenta homología con los genes que codifican para cisteín proteasas de plantas, especialmente Bromelia fastuosa y Ananas cumosus.