Tesis
Efecto de la epicatequina sobre la expresión de genes en Entamoeba histolytica
Fecha
10/08/2009Registro en:
Soto Sánchez, Jacqueline. (2008). Efecto de la epicatequina sobre la expresión de genes en Entamoeba histolytica. (Maestría en Ciencias Quimicobiológicas). Instituto Politécnico Nacional, Sección de Estudios de Posgrado e Investigación, Escuela Nacional de Ciencias Biológicas, México.
Autor
Soto Sánchez, Jacqueline
Institución
Resumen
ABSTRACT: Amoebiasis is a problem of public health in Mexico, searching therapeutic faults have been reported in its treatment there is an increasing interest in the search of new pharmacological alternatives derived from compounds of natural origin. Such a search has led to the isolation of the flavonoid (-)-epicatechin which presents activity antiamoebic. However to the moment his mechanism of action is unknown on the trophozoites of E. histolytica. For what in the present work was determined the effect of the flavonoid (-)-epicatechin on the morphology and the expression of genes trophozoites of E. histolytica strain HMI: IMSS The ultrastructure analysis using transmission electron microscopy showed morphologic changes in the trophozoites treated with (-)-epicatechin, in the cytoplasm was observed increased significantly in the amount of glycogen as well as a decrease in the number and size of the vacuoles whereas to nuclear level was seen a distribution different from the chromatin which was arranged in small clumping around of the nuclear envelope. The profile cDNA-AFLP, using 56 selective primer combinations displayed, a total of 223 fragments, of which 80 were differentially expressed, 47 of which expressed only in presence of (-)- epicatechin, whereas 33 fragments only expressed in the cDNA of the trophozoites not treatment with (-)-epicatechin. After cloning and sequencer one of the fragments differentially expressed (145 pb) was founded to correlate with LLR protein, BspA family of E. histolytica with 63 % of identity, this protein contains repeated FNIP, belonging to the family of the LRR. This protein is suggested might be taking part in the activity proteasomal of E. histolytica. Our results demonstrate that (-)-epicatechin affects so much the ultrastructure, as the expression of genes of E. histolytica of trophozoítes one of them is the gene that codifies for the LRR protein, BspA family. RESUMEN: La amebiasis es un problema de salud pública en México, estudios han reportado fallas terapéuticas en su tratamiento, por lo que hay un creciente interés en la búsqueda de nuevas alternativas farmacológicas derivadas de compuestos de origen natural. Tal búsqueda ha llevado al aislamiento del flavonoide (-)- epicatequina el cual presenta actividad antiamebica, sin embargo al momento no se conoce su modo de acción sobre los trofozoítos de E. histolytica. En el presente trabajo se determinó el efecto del flavonoide (-)-epicatequina sobre la morfología y la expresión de genes en trofozoítos de E. histolytica cepa HMI:IMSS. El análisis estructural usando microscopia electrónica de transmisión mostró cambios morfológicos en los trofozoítos tratados con (-)-epicatequina. En el citoplasma de los trofozoítos se observó un incremento significativo en la cantidad de glucógeno así como una disminución substancial en el número y tamaño de las vacuolas mientras que a nivel nuclear se encontró una distribución diferente de la cromatina la cual se encontró dispuesta en pequeños cúmulos alrededor de toda la membrana nuclear. El perfil cDNA-AFLP, usando 56 combinaciones de oligonucleótidos selectivos, mostró la expresión de un total de 223 fragmentos, de los cuales 80 fueron diferencialmente expresados, 47 de los cuales se expresaron únicamente en presencia de (-)-epicatequina, mientras que 33 fragmentos solo se expresaron en el cDNA de los trofozoítos no tratados con (-)-epicatequina. Después de clonar y secuenciar uno de los fragmentos diferencialmente expresados (145 pb) se encontró que corresponde a la proteína LRR perteneciente a la familia BspA de E. histolytica con un 63% de identidad, esta proteína contiene repetidos FNIP, pertenecientes a la familia de los LRR. Esta proteína se sugiere podría estar participando en la actividad proteosomal de E. histolytica. Nuestros resultados demostrarón que la (-)-epicatequina afectarón tanto la ultraestructura, como la expresión de genes de los trofozoítos de E. histolytica entre los cuales se encuentra el gen que codifica para la proteína LRR.