Tesis
Aislamiento y caracterización estructural de acetogeninas obtenidas de semillas de Annona cherimolia y Annona muricata. Evaluación genotóxica y potencial quimioterapéutico
Fecha
30/06/2009Registro en:
García Aguirre, Karol Karla. (2009). Aislamiento y caracterización estructural de acetogeninas obtenidas de semillas de Annona cherimolia y Annona muricata. Evaluación genotóxica y potencial quimioterapéutico. (Doctorado en Ciencias Quimicobiológicas). Instituto Politécnico Nacional, Sección de Estudios de Posgrado e Investigación, Escuela Nacional de Ciencias Biológicas, México.
Autor
García Aguirre, Karol Karla
Institución
Resumen
ABSTRACT: The present work describes the isolation of acetogenins (ACG) from seeds of Annona cherimolia Mill and Annona muricata and their evaluation of their genotoxic and citotoxic properties. From A. cherimolia Mill three tetrahydroxylated monotetrahydrofuranic ACGs containing C35H64O7 as general formula were isolated, which were named in this work as 1F1, 2F2 and 2F3 according of their retention time in HPLC (14.08, 16.767 and 17.417 min, respectively; MeOH:H2O, 88:12). From A. muricata was isolated another
tetrahydroxilated monoterahydrofuranic ACG with the same general formula (HPLC: retention time 14.5 min; MeOH:H2O, 88:12). According to the cytotoxic activity described for ACGs in in vitro studies, a murine model of colon cancer in mice was developed, in which was quanti1 fied the formation of aberrant crypt foci (AFC) to evaluate the chemotherapeutic effect of the ACG isolated from A. muricata in a subcronic in vivo study during six weeks. The genotoxic and citotoxic effects were also evaluated in peripheral blood. The results showed that 0.17 mg/Kg of ACG from A. muricata reduces 80% the frequency of preneoplastic colon damage induced by azoxymethane (AOM) during six weeks of treatment. Similarly, 0.7 mg/Kg and 0.07 mg/Kg reduce the colon damage in 60 and 40%, respectively. The micronucleus (MN) test revealed that ACG does not induce DNA damage, since no one of the above doses increase the number of MN contained in normochromic erythrocytes (NCE). RESUMEN: En el presente trabajo se describe el aislamiento de acetogeninas (ACG) a partir de las semillas de Annona cherimolia Mill. y Annona muricata para su evaluación toxicológica. En el caso de Annona cherimolia Mill se logró el aislamiento de tres ACGs
tetrahidroxiladas monotetrahidrofurano con fórmula mínima C35H64O7, denominadas en esta trabajo como 1F1, 2F2 y 2F3. Mediante HPLC mostraron tiempos de retención de 14.08, 16.76 y 17.42 min, respectivamente, empleando como sistema de elución MeOH:H2O (85:15). De Annona muricata se aisló una ACG tetrahidroxilada monotetrahidrofuránica con fórmula mínima C35H64O7 y tiempo de retención de 14.50 min, empleando el sistema de disolventes mencionado anteriormente. Considerando la actividad citotóxica que reportan in vitro para las ACGs, se desarrolló un modelo murino de cáncer de colon donde se cuantificó la formación y/o inhibición de focos de criptas aberrantes (FCA), esto con la finalidad de evaluar el efecto quimioterapéutico producido por la ACG obtenida de Annona muricata en un estudio subcrónico de 6 semanas in vivo. Paralelamente se evaluó el efecto genotóxico y citotóxico en sangre periférica.
Los resultados obtenidos permitieron concluir que la ACG de Annona muricata evaluada reduce hasta en un 80% el índice de lesiones preneoplásicas en el colon generadas por el azoximetano (AOM) a una dosis de 0.17 mg/Kg tras seis semanas de tratamiento; el efecto es secundado por la dosis de 0.7 mg/Kg con una reducción del 60% y, finalmente, la dosis de 0.07 mg/Kg redujo el daño 40%. La prueba de micronúcleos (MN) indicó que la ACG evaluada no induce daño sobre el ADN, ya que en ninguna de las muestras evaluadas se observa un incremento significativo en el número de MN presentes en eritrocitos normocrómicos (ENC) con relación al grupo administrado con el vehículo. Complementariamente, se realizó una evaluación de ELISA para apoptosis, empleando plasma sanguíneo tomado en las semanas tres y seis posteriores al tratamiento con la ACG. Los resultados fueron positivos para los tres grupos de ACG evaluados.