Expresión de Ciclooxigenada-1 y Cicloocigenasa-2 en el sitio de daño en el modelo de la formalina

Abstract

RESUMEN: El dolor es la principal causa de asistencia a atención médica. Entre los principales mediadores químicos del dolor están las prostaglandinas, sintetizadas por las ciclooxigenasas de las que existen dos isoformas. El gen de la ciclooxigenasa 1 (cox-1) está en el cromosoma 9 y tiene 22 kb con un promotor sin caja TATA. El gen de la ciclooxigenasa 2 (cox-2), de 8 kb, está codificado en el cromosoma 1 y el extremo 3’ no traducido de su ARNm contiene 17 repetidos AUUUA que lo hacen inestable. En el test de la formalina, modelo de dolor agudo, se ha encontrado que los bloqueadores de la COX-2 tienen sensiblemente menor efecto que los bloqueadores de COX-1, por lo que el objetivo del presente trabajo fue el de analizar la expresión de los genes cox-1 y cox-2 en los tejidos blandos de las extremidades de los animales de experimentación. Se aplicó el test de la formalina en ratas Wistar de 180 a 200 g y se obtuvieron muestras de sus patas en el minuto 40 y 90. Los productos obtenidos mediante RT-PCR de los transcritos de los genes cox-1 y cox-2, de 265 y 304 pb respectivamente, se analizaron por electroforesis y se analizaron por densitometría encontrándose disminución paulatina desde el minuto 40 del mensajero de cox-2 y súbita para el de cox-1 en el minuto 90. Por ensayos de inmunodetección, se demostró que no hay cambios en la expresión de COX-1 en los tres tiempos, mientras que la banda de 70 kDa correspondiente a COX-2 sólo se detectó a partir del minuto 40. Estos revelados sugieren que el dolor agudo en este modelo es mediado en un porcentaje importante por señales distintas a las de las prostaglandinas, además de que estas señales son inducidas preponderantemente por COX-1 ya que COX-2 se expresa en la etapa tardía del experimento.

ABSTRACT: Pain is the most frequent cause of medical care. Prostaglandins that have a large number of biological actions, are also involved in development of pain. They are synthesized from arachidonic acid by cyclooxygenase isoforms. Cyclooxygenase 1 gene is in the 9 chromosome, it is a 22 kpb long and its promoter does not have a TATA box. Cyclooxygenase 2 gene, 8 kpb, is in the 1 chromosome, and its RNA messenger possesses 17 AUUUA sequences than make it unstable. In the formalin test, an acute pain model, it was reported that cyclooxygenase 2 inhibitors are less effective against pain than cyclooxygenase 1 inhibitors. In this context, we examined cox1 and cox2 genes expression in experimental animals. The study was performed in 180 to 200 g Wistar rats that were submitted to the formalin test and killed at 40 and 90 minutes to obtain paws tissues. RT-PCR assays were performed and cox-1 (265 bp) and cox-2 (304 bp) mRNA amplified products were analyzed by electrophoresis and densitometry. We found a rapid decay for cox1 mRNA at 40 minute and a slower decay for cox2 mRNA. Both transcripts disappeared at 90 minute. In Western blot assays, the 70 kDa COX1 was maintained until 90 minutes, whereas the 70 kDa COX2 was only detected at 40 and 90 minute. Our results suggest that pain is mediated by other factors than prostaglandins, that are mainly induced by COX-1, since COX-2 expression occurs later in this pain model.