| dc.description.abstract | La sorbitol deshidrogenasa (SDH) es la principal enzima involucrada en el metabolismo
del sorbitol en especies de la familia de las rosáceas, tales como manzanos o duraznos.
Durante la maduración de los frutos, SDH cataliza la oxidación de sorbitol a fructosa, azúcar
que posee una mayor sensacion de dulzor que el sorbitol. Par lo tanto, SDH juega un papel
importante en el aumento de la dulzura natural de la fruta durante el desarrollo. Esto hace a la
SDH una candidata excelente para modular la composición de azucares en el fruto, dado que el
aumento de su expresión especifica en este órgano provocaría la oxidacion del sorbitol
remanente, que no ha sido metabolizado durante el proceso de maduracion. Con el fin de
generar una nueva van.edad de manzanas con frutos mas diilce§, se utilizaron vectores binarios
en los que una SDH de manzana (MdsoH) se encuentra bajo el control de dos promotores
diferentes, lino constitutivo (35S) y el otro fruto-especifico (PG). En primer lugar, para
comprobar su funcionalidad, se utilizaron plantas de tomate como sistema modelo, las cuales se
transformaron establemente con Agrobacterium tumefaciens, que portaba los vectores
nombrados anteriormente. Se eljgio esta especie como sistema modelo ya que es de
crecimiento rapido y genera frutos tempranamente, en comparacion con el manzano. De esta
manera se pudo evaluar la funcionalidad de los vectores en el corto plazo, al contraste de
haberlo realizado inmediatamente en el manzano, el cual se demora entre 4-5 afros en dar
frutos. Luego de que las plantas de tomate se transformaran, se seleccionaron en medios
suplementados con higrometría. De las plantas resistentes se hicieron extracciones de ADN
gen6mico y posteriormente anali§is de PCR. Estos determinaron que las plantas seleccionadas
efectivamente poselan MdsDH insertado en el genoma. En segundo lugar, ensayos de
actividad enzimática SDH mostraron que los frutos de plantas transformadas establemente
(transgénicas) con el vector 35S-MdsDH, presentan una mayor actividad SDH en comparacion
con su control 35S-GFP. Lo mismo ocurre con los frutos transformados transitoriamente con 35-
MdsDH o PG-MdsDH, los cuales poseen mayor actividad SDH que los frutos transformados
con los vectores controles (35S-GFP a PG-GFP, respectivamente).
Por ultimo, se clonaron las SDH de manzana (MdsDm y de tomate (Lesofty, bajo los
promotores 35S y PG en otro vector binan.o llamado PCP, el cual presenta resistencia al
herbicida BASTA y no a un antibi6tico de selecci6n bacteriano (kanamicina). Los vectores
generados, PCP-35S-MdsDH-NOS. PCP-35S-LesDH-NOS y Pop-PG-MdsDH-NOS, que
otorgan resistencia a la herbicida BASTA, pueden ser utilizados en trabajos futuro | |
