Determinación de la topología de MCEB, una proteína integral de membrana que confiere inmunidad a la microcina E492

Abstract

La microcina E492 es una bacteriocina que actúa sobre cepas de la familia Enterobacteriana a través de la formaci6n de canales ionicos en la membrana de la celula, lo que lleva a su despolarizacion. La proteína MceB es una proteína integral de membrana que confiere inmunidad a esta microcina. No se ha determinado experimentalmente su topología en la membrana citoplasmatica pero perfiles de hidropatia indican que tendría tres regiones transmembrana, c-on el extremo N-terminal en el periplasma y su C-terminal en el citoplasma. Tampoco se conoce su mecanismo de acci6n, pero se cree que cada una de las h6lices transmembrana tienen distinta importancia en la funci6n protectora. Para determinar experimentalmente la topología de esta proteína, se realizaron fusiones entre cada una de las hélices transmembrana y la proteína Lacz, la cual seria activa s6lo cuando la porción de a-galactosidasa se localiza en el citoplasma. Se estudi6 ademas la contribución de cada helice en la actividad protectora. Los resultados obtenidos permiten afirmar que el extremo carboxilo terminal de esta proteína se encuentra hacia el citoplasma de la célula, de igual forma que el primer "loop" hidrofilico. Este resultado concuerda con los modelos obtenidos a partir de perfiles de hidropatia. En lo que se refiere a la proteccion entregada por las distintas h6lices frente a la microcina E492, se observo que la fusion de la proteína completa con P-galactosidasa es resistente, en tanto que la fusiOn de la primera helice con B- galactosidasa es muy sensible a su acci6n, por lo que se concluye que la primera helice transmembrana no es suficiente para entregar proteccion frente a esta bacteriocina