La enzima fosfofructocinasa (Ptk) juega un papel clave en la regulación del metabolismo de carbohidratos. Su actividad puede ser usada como un indicador del flujo glicolítico en un microorganismo. En este trabajo se clonó y caracterizó el gene pfkA de Bacillus subtilis, el cual codifica para la enzima fosfofructocinasa. Este gen fue inactivado por la inserción de un casete de resistencia a espectinomicina (sp) a nivel cromosomal en una cepa silvestre y en una cepa carente del sistema de fosfoenolpiruvato (PEP): fosfotransferasa de azúcares (PTS). Aunque el gen constitutivo pykA esta inmediantamente corriente abajo del gen pfkA, formando un operon, la actividad de piruvato cinasa no fue alterada en la mutante pfkA. La inactivación del gen pfkA mostró un fuerte impacto en el crecimiento de la cepa silvestre y la mutante en PTS, cuando fueron crecidas en medio mínimo Spizizen y medio de esporulación Schaeffer. La inactivacion de pfkA también se reflejó en el porcentaje de esporulación de las cepas silvestre y mutante en PTS crecidas en medio de esporulación, asi como en la producción de metabolitos secundarios (ácidos pirúvico, láctico y acético).Phosphofructokinase (Pfk) plays a key role in the regulation of carbohydrate metabolism. Its activity can be used as an indicator of glycolytic flux in a microorganism. We have cloned and characterized the pfkA gene from Bacillus subtilis, which encodes the enzyme phosphofructokinase. This gene was insertionally inactivated at the chromosomal level in a wild type strain and in strains lacking the PTS:sugar phosphotransferase system (PTS). Although the constitutive pfkA gene is immediately downstream of the pfkA gene, forming an operon, the pyruvate kinase activity was not altered in the pfkA mutant. The inactivation of the pfkA gene had a strong impact on the growth of the wild type strain and PTS mutants in Spizizen's minimal media and Schaetler's sporulation media. Pfk inactivation was also reflected by the timing and percentage of sporulation of the wild type and PTS mutants in sporulation media as well as in the production of organic by-products (pyruvic, lactic, and acetic acids).