EL pulque es una bebida alcohólica que se obtine por fermentación del agua miel o savia de diferentes especies de agave omagueyes pulqueros. El presente estudio tuvo como objetivos el aislamiento eidentificación de levaduras y bacterias ácidos lácticas presentes en muestrasde agua miel, pulque y semillas y la determinación de concentración de acidosláctico (AL)., ácido acético (AAc) y etanol (Et) en las muestras estudiadas. Losailados de levaduras se identificaron por sus característica fenotípicas (morfofisiológicas)y genotípicas (secuencias de pares de bases del dominio D1/D2 ADNr), y lasbacterias ácido lácticas por la secuenciación del  gen  16SADNr. En total se obtuvieron 20 aislados de levadura  y 10 de bacterias ácidas lácticas, los quepara ambos grupos microbianos se identificaron en 4 especies. En agua miel seidentificaron las levaduras:  Candidalusitaniae (1) y Kluyveromyces marxianus (9) y las bacterias: Lactobacillus paracasei(1), lactobacillus sanfranciscensis (1), lactobacillus sp. (1), Leuconostoc citreum(2) y Acetobacter orientalis (1). En pulque K. marxianus (3),  Saccharomyces cerevisiae (2),  Lactobacillus sp. (1) y Leuconostoc lactis(1). En la semilla k. marxianus (2), S. cerevisiae (2), S. paradoxus (1) y lactobacillussp. (2). K. marxianus se aisló de las 3 muestras estudiadas y correspondió al70% del total de los aislados, fue la especie más termo-tolerante (45◦C), ytoleró de 5 -7% v/v de etanol. S. cerevisiae y S. paradoxus presentaron lamayor tolerancia al etanol (9%v/v). Las especies de lactobacillus fueron lasmás abundantes de las bacterias (60%). C. lusitaniae, K. maxianus y S.cerevisiae ya había sido encontradas en agua miel y en pulque, mientras que S.paradoxus es por primera vez aislada en esta bebida. En lo que respecta a lasespecies de bacterias ácido lácticas estas son identificadas por primera vez enlos sustratos estudiados. En aguamiel  seobtuvo 0.8% de AL y 0.07% de AAC;  enpulque: 0.1% AL, 0.03% AAC Y 6.6% de Et y en semilla: 0.04% de AL y 3.2% de Et.