Diferenciación de serovares de leptospiras patógenas mediante PCR del gen ligB y secuenciación = Differentiation of pathogenic leptospires spp by PCR of ligB gene and sequencing

Abstract

La leptospirosis es la zoonosis de mayor distribución mundial. El objetivo del presente trabajo fue desarrollar una técnica molecular que diferencie leptospiras patógenas. Se amplificó mediante PCR y se secuenció una región de la adhesina ligB, presente solo en las especies patógenas. Se utilizaron los iniciadores ligBFpet y ligBRpet. Dichos iniciadores lograron amplificar el ADN blanco de 6 cepas patógenas referenciales de Leptospira interrogans (serovar Pomona cepa Pomona, serovar Canicola cepa Hond Utrecht IV, serovar Copenhageni cepa M 20, serovar Wolffi cepa 3705, serovar Pyrogenes cepa Salinem y serovar Hardjo cepa Hardjoprajitmo) y el de Leptospira borgpetersenii serovar Castellonis cepa Castellon 3; también el de 4 cepas patógenas aisladas de bovino, porcino, rata y comadreja. En las 2 cepas referenciales no patógenas utilizadas, Leptospira biflexa serovar Patoc cepa Patoc I y L. biflexa serovar Andamana cepa Andamana, no hubo amplificación. La secuenciación de los productos amplificados expuso una suficiente variación entre los serovares estudiados, que permite diferenciarlos.

Leptospirosis is a zoonosis having worldwide distribution. The objective of this work was to develop a molecular technique to differentiate pathogenic Leptospira spp. A region of adhesin ligB, present only in the pathogenic species was amplified by PCR and sequenced. ligBRpet and ligBFpet primers were used, which amplified the target DNA from pathogenic L. interrogans reference strains serovars Pomona strain Pomona, Canicola strain Hond Utrecht IV, Copenhageni strain M 20, Wolffi strain 3705, Pyrogenes strain Salinem, Hardjo strain Hardjoprajitmo, L. borgpetersenii serovar Castellonis strain Castellon 3 and 4 pathogenic strains isolated from bovines, pigs, rats and opossums. L. biflexa serovars Patoc strain Patoc I and Andamana strain Andamana were not amplified. Sequencing of the amplified products exhibited sufficient variation among serovars, which differentiates them