bachelorThesis
Aislamiento y caracterización molecular de cepas fitoplanctónicas obtenidas en Engabao, Guayas-Ecuador.
Fecha
2021Registro en:
BCNAT570CAB289
Autor
Cabrera Gavilanes, Daniela Melissa
Institución
Resumen
El interés industrial en microorganismos fitoplanctónicos como microalgas y
cianobacterias se debe por el alto potencial biotecnológico que poseen en
sintetizar compuestos bioactivos, facilidad de adaptarse a diferentes fuentes de
nutrientes, condiciones extremas de supervivencia y la capacidad bioabsorbente
de metales pesados principalmente en aguas residuales. El objetivo del presente
estudio consistió en aislar y caracterizar fenotípica y genotípicamente
microorganismos fitoplanctónicos de piscinas de estabilización de Engabao,
Guayas-Ecuador, mediante el uso de diferentes medios de cultivos y marcadores
moleculares ITS, ITS2, LSU y 16S RNAr. Los resultados del cultivo celular
durante siete días mostraron la microalga Chls1 con medio BG11 pH 7.8 alcanzó
25.4 x 106 cel mL-1
, la cianobacteria Syn1 fue de 340.6 x 106 cel mL-1
, mientras
que para Nod1 se empleó análisis de clorofila a alcanzando al séptimo día 6.33
μg mL-1
. Los estudios moleculares se realizaron empleando un protocolo
modificado de extracción y purificación de ADNg obteniendo una óptima
concentración y calidad del ADN para las tres cepas: Chls1 146 ng µL-1
, Syn1
326 ng µL-1 y Nod1 158.8 ng µL-1
. El uso de análisis polifásicos en base a
caracteres morfológicos y ADNg de las cepas, se amplificó por PCR y se
secuenció; las cepas identificadas fenotípica y genotípicamente mediante los
primers ITS2, ITS y LSU corresponde a la microalga Chlorella sorokiniana con
99,48%, 99,07% y 99,77% de similitud de identidad, mientras que los aislados
cianobacterianos Synechococcus sp. y Nodosilinea sp. con el análisis de la
región 16S RNAr presenta porcentajes de identidad de 97,47% y 99,83%; a
pesar de no emplear cebadores específicos para estos microorganismos, el uso
de varias regiones, aumenta la confiablidad en la identificación taxonómica y
filogenética; estas especies poseen alto potencial biotecnológico y de gran
impacto económico. The industrial interest in phytoplanktonic microorganisms such as microalgae and
cyanobacteria are due to the high biotechnological potential, they have in
synthesizing bioactive compounds, ease of adapting to different sources of
nutrients, extreme survival conditions and the bioabsorbent capacity of heavy
metals mainly in wastewater. The objective of this study was to isolate and
characterize phenotypically and genotypically phytoplanktonic microorganisms
from stabilization pools in Engabao, Guayas-Ecuador, using different culture
media and molecular markers ITS, ITS2, LSU and 16S RNAr. The results of the
cell culture during seven days showed the Chls1 microalgae with BG11 pH 7.8
medium reached 25.4 x 106 cells mL-1
, the cyanobacterium Syn1 was 340.6 x
106 cells mL-1
, while for Nod1 chlorophyll analysis was used to reach on the
seventh day 6.33 μg mL-1
. Molecular studies were carried out using a modified
gDNA extraction and purification protocol, obtaining optimal DNA concentration
and quality for the three strains: Chls1 146 ng µL-1
, Syn1 326 ng µL-1 and Nod1
158.8 ng µL-1
. The use of polyphasic analysis based on morphological characters
and gDNA of the strains, was amplified by PCR and sequenced; the strains
identified phenotypically and genotypically by the primers ITS2, ITS and LSU
correspond to the microalgae Chlorella sorokiniana with 99.48%, 99.07% and
99.77% identity similarity, while the cyanobacterial isolates Synechococcus sp.
and Nodosilinea sp. With the analysis of the 16S RNAr region, it presents identity
percentages of 97.47% and 99.83%; Despite not using specific primers for these
microorganisms, the use of several regions increases the reliability of taxonomic
and phylogenetic identification; These species have high biotechnological
potential and great economic impact.