proyecto
Desarrollo de Análisis Genético para Determinar la Predisposición de Caballos Purasangre a Desarrollar Tendinopatías
Registro en:
17VIP-87809
2017-87809-INNOVA_PRODUCCION
Autor
Karymy Andrea Negrete Zapata
Asesorias Elite Genomics Spa
Institución
Resumen
Desarrollar un Método de Predicción Riesgo de Desarrollo de Tendinopatías de Caballos Purasangre en Base al Análisis de un Polimorfismo en el Gen Tenascina C y Otros Asociados a su Expresión y Establecer un Vínculo con la Empresa Proveedora de Conocimiento Fundación Instituto Investigación Austral que Será la Encargada de Realizar la Investigación y el Desarrollo en este Proyecto. El Servicio Prestado por Fundación Instituto Investigación Austral Consiste en Desarrollar el Análisis Genético de un Polimorfismo Asociado al Gen de Tenascina C y Correlacionar la Presencia del Polimorfismo con el Desarrollo de Tendinopatías de los Ejemplares Analizados. El Servicio a Contratar Tiene Tres Objetivos Específicos que Fueron Determinados en Conjunto con el Proveedor Experto. Estos Son: 1. - Identificar los Polimorfismos a Analizar en Tenascina C y Otros Genes Asociados a su Expresión. 2. - Estandarizar Condiciones para Secuenciación de los Polimorfismos (snps). 3. - Establecer Correlación entre la Presencia del Polimorfismo y Desarrollo de Tendinopatía del Ejemplar. Considerando los Objetivos Planteados el Plan de Actividades Detallado es el Siguiente: 1. - Seleccionar Polimorfismos a Analizar: Esta Actividad Requiere Análisis Bibliográfico y Bioinformático para Poder Seleccionar los Polimorfismos que se Encuentren Presentes en Caballos Purasangre. Resultados Esperados: Selección de 3 a 4 Polimorfismos que se Encuentren Presentes en el Genoma de Caballos Purasangre en el Gen Tenascina C y Otros Genes Asociados a su Expresión. 2. - Diseño de Partidores y Estandarización de la Amplificación y Secuenciación de los Genes Seleccionados: una Vez que Hayan Sido Seleccionados los Polimorfismos que se Utilizarán para el Desarrollo del Análisis se Deben Diseñar los Partidores para Amplificar un Fragmento Específico de Cada Gen que Permita la Secuenciación del Snp. Cada Pareja Partidores Deben Contar con las Siguientes Características: Deben Tener Longitudes de entre 19 y 25 Nucleótidos Deben Ser Ricos en Contenido en %gc Ser Complementarios Únicamente a la Región a Amplificar y Tener Temperaturas de Fusión Similares entre Otras para Lograr una Amplificación por Pcr Exitosa. Una Vez Obtenidas las Parejas de Partidores Deben Ajustarse las Temperaturas y Tiempos en el Ciclo de Pcr Concentración de los Reactivos del Mix de Pcr y Concentración de Muestra para Cada Gen a Analizar. El Éxito de este Proceso Será Comprobado por Medio de Secuenciación de Cada Gen Utilizando Dos Muestras de Prueba de Caballos de Hípica. Resultados Esperados: Obtener Secuenciación de Alta Resolución para Cada Gen Secuenciado. 3. - Toma de Muestra de Ejemplares a Analizar: se Espera Conseguir Muestras de Sangre de 40 Ejemplares de Hípica en Chile de 3-4 Años de Edad con Participación en al Menos 10 Carreras 20 con Presencia de Tendinopatía y 20 que No la Hayan Desarrollado. Resultados Esperados: Obtención de 40 Muestras de Sangre. 4. - Extracción de Material Genético de los Ejemplares: el Protocolo de Extracción de Adn a Partir de Muestra de Sangre se Realizará Utilizando un Buffer de Lisis para Romper la Distintas Membranas que Protegen al Adn Dentro de la Célula y se Utilizará Solventes Orgánicos para Aislar el Adn que Será Lavado con Etanol para Finalmente Resuspenderlo en Agua Nanopura y Almacenarlo hasta su Uso. La Pureza de Adn Obtenido Será Determinada Utilizando un Espectrofotómetro Cuantificando la Absorbancia a 260 Nm y 280 Nm lo que Permitirá Determinar la Concentración del Material Genético y en Nivel de Contaminación con Proteínas Resultados Esperados: Obtención de Material Genético Puro con una Concentración de al Menos 100 Ng/ul para Cada Uno de los 40 Caballos. 5. - Secuenciación de los Genes Seleccionados: Posterior a la Extracción del Material Genético de Cada Ejemplar se Realizará la Secuenciación de los Genes Seleccionados de Acuerdo a las Condiciones Obtenidas en el Proceso de Estandarización. Resultados Esperados: Obtención de Polimorfismos Secuenciados para los 40 Ejemplares. 6. - Análisis Estadístico de Correlación entre Genes y Desarrollo de Tendinopatías. Se Espera Obtener una Correlación donde la Presencia de Determinado Polimorfismo Indique Mayor Probabilidad de Desarrollar Tendinopatía y que se Observe lo Contrario en Ausencia del Polimorfismo. Corporación de Fomento de la Producción