Neospora caninum is a protozoan parasite that affects cattle and dogs, its infections seem to be widely prevalent in Chile. To date, nothing is known of the presence of N. caninum in horse population of the country. In South America, two seroprevalence studies have failed to find antibodies in Argentina and Brazil. The objective of the study was to investigate the presence of N. caninum exposure in horses of Chile. Sera from 145 asymptomatic horses (87 from IX Region and 58 from VII Region) were examined for antibodies to Neospora using the Neosporaagglutination test (NAT). Antibodies (≥ 1:40) to N. caninum were found in 47 (32%) of 145 horses. The results have been also tabulated by breed. This is the first report of presence of antibodies against Neospora in horses of Chile and South America. Although equine clinical neosporosis has not been reported other than from United States, a presuntive diagnosis of the disease should be taken into consideration when evaluating abortion and or Central Nervous System illness.Neospora sp. es un parásito protozoario causante de abortos y/o enfermedad del Sistema Nervioso Central (SNC) en caninos, bovinos, ciervos, caprinos, ovinos, equinos y otros. En equinos, se lo ha involucrado como causa de aborto, mortalidad neonatal y enfermedades del SNC y viscerales. La especie que infecta a los equinos es distinta a Neospora caninum y se denomina Neospora hughesi. En Chile no existe evidencia de infección en equinos, sin embargo, la enfermedad ha sido informada en bovinos y caninos, por lo que el objetivo de este trabajo fue buscar anticuerpos contra la enfermedad en sueros equinos . Para ello se tomaron muestras de sangre a 145 equinos (87 de la IX Región y 58 de la VIII Región de Chile). Los sueros fueron analizados mediante Test de Aglutinación para Neospora (NAT). Cada suero se diluyó en 1:40 en solución salina tamponada (PBS pH 7.2) conteniendo 2- mercaptoetanol y fueron analizados en 1:40 y 1:80. Los sueros positivos a 1:80 fueron examinados a 1:160 y 1:320. Anticuerpos contra N.caninum (≥ 1:40) se encontraron en 32% (47/145) de los equinos estudiados. Debido a que N.caninum y N.hughesi dan reacción cruzada, ambos o uno de ellos podrían ser los responsables de la seropositividad. Estos resultados indican que equinos provenientes de la VIII y IX regiones de Chile son reaccionantes a la infección de Neospora, por lo que su diagnóstico presuntivo debería ser considerados ante la presencia de cuadros clínicos con sintomatología nerviosa y/o abortos en esta especie.