During July 1997, 71 bulk tank milk samples from dairy herds located in southern Chile were examined for mycoplasma by bacteriological culture. Fifty-three composite milk samples from cows with clinical mastitis or high somatic cell counts were also examined. Isolates were differentiated to species level by an indirect immunoperoxidase test. Mycoplasma bovis was isolated from five herds while Acholeplasma laidlawii was isolated from two herds. Only one cow milk sample yielded A.laidlawii; the remaining 52 samples were negative for mycoplasma. This is the first report of isolation of mycoplasma from cow milk in Chile. Veterinarians and dairy farmers should be aware that mycoplasma bovine mastitis, a highly contagious disease, is present in dairy herds in Chile.Durante el mes de julio de 1997 se realizaron exámenes bacteriológicos para el aislamiento de micoplasmas en 71 muestras de leche de estanque provenientes de rebaños lecheros del sur de Chile. Además, se cultivaron 53 muestras compuestas de leche de vacas con mastitis clínica o con elevado recuento de células somáticas. Los aislamientos de Mycoplasma se identificaron a nivel de especie mediante una prueba indirecta de inmunoperoxidasa. Mycoplasma bovis se aisló en 5 rebaños y Acholeplasma laidlawii en dos rebaños. De las muestras individuales de vaca sólo uno resultó positiva a A. laidlawii, siendo las 52 restantes negativas a Mycoplasma. Esta es la primera comunicación sobre aislamiento de micoplasmas de leche de vacas en Chile. Los médicos veterinarios y productores lecheros deberían tener presente que la mastitis por micoplasma, una enfermedad altamente contagiosa del bovino, está presente en los rebaños lecheros del sur de Chile.