Papel do miR-17-5p na expressão e regulação do receptor gama ativado por proliferadores de peroxissoma em carcinoma hepatocelular

Abstract

Hepatocellular carcinoma (HCC) is the most common primary liver cancer, accounting for 90% of liver-initiated liver cancers, and 70-80% of all liver cancers. Liver cancer has a higher death rate, being the fourth deadliest tumor. Peroxisome proliferator-activated receptors (PPARs) belong to a family of ligand-activated nuclear receptors that act as transcription factors, regulating the expression of multiple genes related to glucose and lipid metabolism. Dysregulation of expression of these receptors signal critical mechanisms that may favor the development of hepatocellular carcinoma. PPARγ, in addition to regulating genes that control lipid metabolism, has ligands that can inhibit or promote cancer development. MicroRNAs (miRNAs) are small non-coding regulatory RNA molecules that act in post transcriptional regulation of target gene expression, playing a role in multiple cellular processes. The miR-17-5p was significantly associated with metastasis and staging of hepatocellular carcinoma. Thus, this project aims to validate the relationship between the PPARγ gene and miR-17-5p in the regulation of its expression, thus contributing to the understanding of the mechanisms of cancer development and improvement of knowledge in diagnosis, prevention and treatment of HCC. To validate the PPARγ gene regulation by miR-17-5p in HCC, cells of the Huh-7 and HepG2 lineages were transfected with the mimic of hsa-miR-17-5p. The results showed that the expression levels of miR-17-5p were increased compared to the negative control (RQ=1.00) in the Huh-7 (RQ=9.8164) and HepG2 (RQ=27.3706) strains. The gene expression of PPARγ showed a decrease in cells transfected with miR-17-5p in the Huh-7 cell line (Mean/Median RQ= 0.5953, p=0.0001*), as in the HepG2 cell line (Mean/Median RQ= 0.7677, p= 0.0015*) in relation to the negative control (RQ=1). The correlation between PPARγ gene expression and miR-17-5p occurred from negatively in the Huh-7 lineage (r= -0.8590, p=0.0063*) and HepG2 (r=-0.5669, p=0.2381) miR-17-5p has an important relationship with the PPARγ gene in hepatocellular carcinoma, and it can act by significantly regulating the expression of the gene, when overexpressed, and potentially culminating in an inflammatory and tumorigenic environment. miR-17-5p demonstrates an innovation for the treatment, diagnosis and early detection of cancer, as it represents a possible important biomarker for HCC.

O carcinoma hepatocelular (CHC) é o câncer primário de fígado mais frequente, sendo responsável por 90% dos cânceres hepáticos iniciados no fígado, e, por 70- 80% de todos os cânceres de fígado. O câncer de fígado possui uma elevada taxa de óbito, sendo o quarto tumor mais letal. Os receptores ativados por proliferadores de peroxissoma (PPARs) são pertencentes a uma família de receptores nucleares ativados por ligantes, que atuam como fatores de transcrição, regulando a expressão de múltiplos genes relacionados ao metabolismo de glicose e lipídios. As desregulações da expressão desses receptores sinalizam mecanismos críticos que podem favorecer o desenvolvimento do carcinoma hepatocelular. O PPARγ, além de regular genes que controlam o metabolismo lipídico, possui ligantes que podem inibir ou promover o desenvolvimento do câncer. Os microRNAs (miRNAs) são pequenas moléculas de RNA reguladoras não codificantes, que atuam na regulação pós transcricional da expressão de genes-alvo, apresentando papel em múltiplos processos celulares. O miR-17-5p foi significativamente associado à metástase e estadiamento do carcinoma hepatocelular. Assim, este projeto visa validar a relação entre o gene PPARγ e o miR-17-5p na regulação de sua expressão, contribuindo dessa forma, com a compreensão dos mecanismos de desenvolvimento do câncer e aprimoramento dos conhecimentos em diagnósticos, prevenção e tratamento do CHC. Para validar a regulação gênica do PPARγ pelo miR-17-5p no CHC, as células de linhagem Huh-7 e HepG2 foram transfectadas com o mimetizador do hsa-miR-17- 5p. Os resultados demonstraram que os níveis de expressão do miR-17-5p foram aumentados em relação ao controle negativo (RQ=1,00) nas linhagens Huh-7 (RQ=9,8164) e HepG2 (RQ=27,3706). A expressão gênica do PPARγ apresentou diminuição nas células transfectadas com o miR-17-5p na linhagem de células Huh-7 (Média/Mediana de RQ= 0,5953, p=0,0001*), tal como na linhagem de células HepG2 (Média/Mediana de RQ= 0,7677, p=0,0015*) em relação ao controle negativo (RQ=1). A correlação entre a expressão gênica do PPARγ e o miR-17-5p ocorreu de maneira negativa na linhagem Huh-7 (r= -0,8590, p=0,0063*) e HepG2 (r=-0,5669, p=0,2381).O miR-17-5p possui importante relação com o gene PPARγ em carcinoma hepatocelular e pode atuar na regulação da expressão do gene, quando superexpresso, potencialmente culminando em um ambiente inflamatório e tumorigênico. O miR-17-5p demonstra uma inovação para tratamento, diagnóstico e detecção precoce de câncer, visto que representa um possível biomarcador importante para o CHC.