Entamoeba histolytica: detection of coproantigens by purified antibody in the capture sandwich ELISA

Abstract

A sensitive and specific Capture Sandwich ELISA (CSE) was developed using polyclonal purified rabbit antibodies against three different axenic strains of Entamoeba histolytica: CSP from Brazil and HM1 - IMSS from Mexico, for the detection of coproantigens in fecal samples. Immunoglobulin G (IgG) againstis E. histolytica was isolated from rabbits immunized with throphozoites whole extract in two stages: affinity chromatography in a column containing E. histolytica antigens bound to Sepharose 4B was followed by another chromatography in Sepharose antibodies 4B-Protein A. A Capture Sandwich ELISA using purified antibodies was able to detect 70ng of amebae protein, showing a sensitivity of 93% and specificity of 94%. The combination of microscopic examination and CSE gave a concordance and discordance of 93.25% and 6.75%, respectively. It was concluded that CSE is highly specific for the detection of coproantigens of E. histolytica in feces of infected patients, is quicker to perform, easier and more sensitive than microscopic examination.

Foi desenvolvido um teste de ELISA de Captura usando anticorpos policlonais purificados obtidos em coelhos contra três diferentes cepas axênicas de Entamoeba histolytica (ICB-CSP and ICB-462 do Brasil e HM1 do México) para detecção de coproantígenos em amostras de fezes de indivíduos: a) sintomáticos, b) assintomáticos, c) com outros parasitos intestinais, e d) sadios. Imunoglobulina G (IgG) contra E. histolytica foi isolada de imune soro de coelho, em duas etapas: cromatografia de afinidade em uma coluna contendo antígenos de E. histolytica unidos à Sepharose 4B, seguido por outra cromatografía em Sepharose 4B Proteína A. O teste de ELISA usando anticorpos purificados, foi capaz de detectar até um só trofozoíto por lâmina ou 70 ng de proteína de ameba por orifício, apresentando uma sensibilidade de 93% e uma especificidade de 94%. A combinação do exame microscópico com o método de ELISA de Captura teve uma concordância e discordância de 93,25% e 6,75%, respectivamente. Pode-se concluir que o teste de ELISA de Captura utilizando anticorpo purificado é altamente específico para a detecção de coproantígenos de E. histolytica em fezes de pacientes infectados, rápido, fácil e mais sensível que o exame microscópico.