Amplificación de la región 5'UTR-C del genoma de los cuatro serotipos de virus dengue

Abstract

Las infecciones por virus Dengue (DENV) representan la enfermedad viral transmitida por mosquitos más importante en términos de morbi-mortalidad. El genoma de DENV es un ARN de cadena simple con dos regiones no traducibles (UTR, Untranslated Region ) en los extremos (5 ́UTR y 3 ́UTR) limitando un marco abierto de lectura (ORF, Open Reading Frame ). Las 5 ́UTR y 3 ́UTR son determinantes en los mecanismos de replicación y síntesis de proteínas virales, haciendo de los mismos blancos potenciales para comprobar regulación y/o inhibición de tales procesos mediante moléculas antivirales. El objetivo de la investigación fue amplificar la región 5 ́UTR-C ( Untranslated Region-Capsid ) del genoma de los cuatro serotipos de DENV luego de la optimización de la Transcripción Reversa acoplada a Reacción en Cadena de la Polimerasa (RT-PCR), la cual podría emplearse para evaluar procesos de traducción viral en sistemas eucariotas in vitro y su inhibición con potenciales antivirales. Se emplearon cepas de los distintos serotipos virales (DENV-1, DENV-2, DENV-3 y DENV-4) y se realizaron ensayos con diferentes concentraciones de los cebadores y de las enzimas Taq polimerasa y Transcriptasa Reversa. Los resultados indicaron que la mejor reacción se obtuvo con concentraciones de cebadores de 0,5 μM (DENV-1 y DENV-3), 1 μM (DENV-2) y 0,75 μM (DENV-4). Las enzimas empleadas mostraron alta eficiencia a la mínima cantidad evaluada (1,25 U). De acuerdo a las condiciones especificadas, se obtuvieron productos de la región 5 ́UTR-C con una reacción de RT-PCR robusta y confiable para la amplificación de estos productos.