A mastite é a infecção das glândulas mamárias em bovinos, sendo um dos maiores motivos de perdas na produção leiteira tanto para o produtor quanto para a indústria. Um dos principais agentes etiológicos da mastite é a bactéria Staphylococcus aureus. Entretanto, a fim de evitar o uso de antibióticos no tratamento, uma das alternativas que se destaca são os Microrganismos Eficientes (EMs), que são comunidades microbianas benéficas. Assim, o objetivo desta pesquisa é avaliar a atividade antagônica entre a bactéria causadora da mastite bovina, S. aureus, e os EMs. O ensaio de antagonismo quantitativo envolveu as células bacterianas em contato com os EMs, e a análise do crescimento foi feita pela contagem de colônias. Já o ensaio qualitativo, por difusão em discos embebidos nos metabólitos dos EMs colocados em contato com a bactéria, para formação de halos no crescimento. A partir do ensaio qualitativo, não houve formação de halos no crescimento bacteriano, indicando que apenas os metabólitos não são suficientes para o efeito antagônico. O ensaio de antagonismo por meio do contato direto demonstrou que não houve redução no crescimento bacteriano, sendo necessárias mais pesquisas para avaliar esta atividade antagônica entre a S. aureus e os Microrganismos Eficientes.