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Dinámica in vitro de biopelículas de la microbiota vaginal y de Listeria monocytogenes, Streptococcus agalactiae y Escherichia coli sobre la membrana amniótica
Dinámica in vitro de biopelículas de la microbiota vaginal y de Listeria monocytogenes, Streptococcus agalactiae y Escherichia coli sobre la membrana amniótica
Autor
Farinati, Alicia
Arcos, Marisa
Marqués, Melina
Orsini, Adrian
Semeshchenko, Daniel
Souto, Agustina
Villanueva, Rubén
Institución
Resumen
La biopelícula de Streptococcus agalactiae (SGB) produce infecciones neonatales severas. Las investigaciones que se llevan a cabo no incluyen generalmente la evaluación de la formación de biopelícula (BP) que se considera factor de virulencia, resistencia y barrera inmunológica. Nuestro objetivo fue demostrar la influencia del pH en la formación de las BP. Estudiamos 12 aislamientos de muestras urogenitales. Se efectuó la determinación de la Concentración Inhibitoria Mínima (CIM) con la clindamicina (CLI) a pH 4.0; 7.3 y 9.0. La formación de las BP se efectuó con técnicas propias y se estudiaron cuali y cuantitativamente.En síntesis cada aislamiento se inoculó en Trypticase Soja Caldo (TSC) a pH 4.0; 7.3 y 9.0 y un dispositivo de vidrio (DV) se colocó en cada uno. Se efectuaron los respectivos controles. La incubación se efectuó a 36°C y se observaron con microscopía óptica a las 6, 12, 24 y 48 horas previa tinción con cristal violeta. El estudio cuantitativo se efectuó con microplacas de 96 pocillos planos, se incubaron de igual manera y se leyeron con espectrofotómetro (RT 2100C absorbance mode: 450 nm). La CIM para CLI fue a pH 7.3 de 0.25 mg/l en 6/12 y de 0.5 mg/l en 6/12; a pH 9.0 fue de 0.125 mg/l en 1/12; 1.0 mg/l en 8/12 y de 2.0 mg/l en 3/12. Todos los aislamientos formaron BP pero su producción estuvo relacionada al aislamiento y no hubo diferencias significativas a los diferentes pH. En algunos se observó incremento de la BP con el incremento del pH como en la cepa 2 intensamente hemolítica. Nuestro estudio sugiere que todos forman BP a diferentes pH y que aquellos aislamientos que incrementan su BP a pH >4.5 podrían tener ventajas de sobrevida en la vagina ya sea cuando hay vaginitis aeróbicas por SGB pero sobre todo cuando acompañan a patologías endógenas con pH elevado como vaginosis bacteriana con el consiguiente riesgo perinatal en la mujer embarazada. CLI tuvo mejor actividad a pH elevados que le pueden proporcionar ventajas sobre otros antibióticos debido a su capacidad de penetrar en la BP y de actuar sobre el exopolímero. Streptococcus agalactiae or Group B Streptococcus (GBS) can produce neonatal severe diseases.Common investigations do not include BF evaluation which is considered a virulence, phenotipicresistance factor and immunologic barrier. Our aim was to demonstrate the influence of differentpH on BF formation from urogenital GBS. We identified 12 GBS isolates from urogenital samples.The sensitivity test and the MIC with clindamycin (CLI), were performed at pH 4.0; 7.3 and 9.0.The GBS BF was investigated using glass coupon (GC) and microtiter assays (MA) for quantitativestudy. Each isolate was inoculated in Trypticase Soy Broth (TSB) at pH 4.0; 7.3 and 9.0 andone GC was introduced in all tubes. Everything was done with its respective control and read byoptical microscopy after 6, 12, 24 and 48 h. Microplates with 96 flat wells were used in quantitativestudies.All were incubated in similar way and were read with spectrophotometer (RT 2100C absorbancemode: 450 nm). The MIC against CLI at pH 7.3 was 0.25mg/l in 6/12; 0.5 mg/l in 6/12; atpH 9.0 was 0.125 mg/l in 1/12; 1.0 mg/l in 8/12 and 2.0 mg/l in 3/12. All isolates formed BF buttheir production seems strain dependent because we could not observed significant differences inthe isolates at differents pH. In some GBS we observed increased and in others decreased of BFformation at alkaline pH after aerobic incubation. We observed that some strains did not increasedthe BF formation with increased pH as strain 2. Our study suggests that all GBS are BF formers atdifferent pHs. The GBS that showed increase in BF formation at high pH could be more pathogens,have better survival in vagina and thereby could be a risk factor for GBS perinatal infection in pregnancy,mainly with exits with other infection with increased pH as bacterial vaginosis. CLI wasbetter in alkaline pH and can provide advantage over other antibiotics due to capacity to penetrateBF and their activity on exopolymer.