RESUMEN Bacillus thuringiensis es un microorganismo que constituye una alternativa ecológicamente sostenible a los insecticidas químicos, debido a la actividad tóxica sobre distintos tipos de invertebrados. En el mundo las investigaciones sobre Bacillus thuringiensis (Bt) se inician con la búsqueda de cepas que produzcan nuevas proteínas Cry que pudieran combatir diferentes plagas, de interés agrícola y de salud pública. Es por esto que en este trabajo el objetivo principal fue aislar y caracterizar cepas de Bt var. kurstaki (Btk) colectadas en suelos de alta montaña. Los aislados fueron caracterizados por métodos morfológicos, bioquímicos y moleculares. En total se colectaron 11 aislados en zonas intervenidas con actividad agrícola (ZI) y 5 en zonas no intervenidas (ZNI), los cuales fueron identificados de acuerdo al fenotipo característico de Bt. De las cepas identificadas como Bt, sólo 6 de los 16 aislados presentaron el gen cry1. Paralelamente, se realizó el análisis de estos aislados en geles de poliacrilamida (SDS-PAGE), donde 9 de los 16 aislados evaluados presentaron la banda dominante de 140 KDa, caracteritica de Btk. Los resultados obtenidos permitieron la identificación de 9 cepas de Bacillus thuringiensis en alta montaña. Posteriormente, se evaluó la actividad tóxica de dichos aislados de Bt mediante bioensayos con larvas de Spodoptera frugiperda, obteniendo que sólo 4 cepas mostraron una mortalidad mayor del 70 %. Esto constituye un aporte a la colección establecida en el Laboratorio de Procesos Fermentativos, cuyo propósito es desarrollar formulaciones comerciales de bioinsecticidas de producción nacional. Palabras claves: Bacillus thuringiensis, PCR, Spodoptera frugiperda, bioinsecticida, Btk.TUTOR: Lic. Roxana Gajardo