Thesis
Diseño de una prueba que permita detectar la presencia de δ-endotoxinas de Bacillus thuringiensis variedad Kurstaki en un medio de cultivo
Autor
Alcina Jaimes, Marubetsy Carolina
Institución
Resumen
RESUMEN
Bacillus thuringiensis (Btk) es el principal agente de control biológico usado
a nivel mundial. Su producción como bioinsecticida, requiere de formulaciones de
medios de cultivo que permitan el crecimiento de la bacteria y la obtención del
producto insecticida, es decir, de la -endotoxina contenida en el complejo esporacristal.
En Venezuela, el desarrollo de metodologías que permitan evaluar el proceso
fermentativo y a su vez detectar la capacidad efectiva de Btk para producir cristales
tóxicos ha sido limitado. Por este motivo, en este trabajo se planteó como objetivo
diseñar una prueba que permita detectar la presencia de -endotoxinas, durante el
desarrollo de un cultivo de Btk a través de inmunoensayos. Para ello, se procedió a
purificar la proteína Cry1Aa, la cual fue empleada para la producción de un suero
hiperinmune utilizando conejos como modelo experimental. La respuesta de
anticuerpos en función del tiempo fue monitoreada a través de un ELISAi, y el
reconocimiento de la proteína por parte del suero hiperinmune fue verificado
empleando las técnicas de Western blot y Dot Blot. Finalmente, se evaluó la cinética
de síntesis de la proteína Cry1Aa de Btk en medio A80, mediante las técnicas
inmunoquímicas mencionadas, evidenciando el incremento progresivo en el
reconocimiento de esta proteína hasta la fase estacionaria, lograndose de esta manera
la estandarización de un método sencillo y reproducible para la detección de -
endotoxinas. TUTOR: Lic. Roxana Gajardo ; Dra. Mariana Eleizalde