Efecto del almidón comercial de Zea mays sobre la cinética de producción de amilasas por Bacillus licheniformis

Abstract

El presente trabajo de investigación tuvo como objetivo de establecer el efecto del almidón comercial de Zea mays sobre la cinética de producción de amilasas por B. licheniformis en un biorreactor agitado hasta las 72 horas de incubación, utilizando como control el almidón químicamente puro (q.p.). El cultivo bacteriano fue reactivado mediante siembra en placas con agar almidón 0.5% e incubadas a 37°C por 24h; al mismo tiempo se verificó la capacidad hidrolítica mediante la prueba de lugol, y pureza con coloración Gram. A partir del cultivo reactivado se preparó una suspensión bacteriana (inóculo) equivalente al tubo N° 3 del nefelómetro de Mc Farland (9.0 x 108 UFC/mL) con SSFE. Luego, se agregó 20mL del inóculo estandarizado a cada biorreactor (Problema y Control) conteniendo 180mL de caldo almidón 0.5% - buffer fosfato 0.2 M, pH 6.0, suplementado con sales: (NH4)2SO4, CaCl2 y CuSO4. Seguidamente, se puso en funcionamiento e incubó a 40°C. Se determinó la producción de amilasas a las 0, 12, 24, 36, 48, 60 y 72h, extrayendo 10 mL de muestra del biorreactor, que fue centrifugado a 2500 rpm por 10 min. En cada sobrenadante (extracto enzimático) se determinó la cantidad de amilasas producidas en relación al tiempo de incubación, midiendo la actividad amilásica (unidades enzimáticas/mL) sobre almidón q.p. a 50 °C, pH 6.0, por 1h a través de la dosificación del almidón residual en el espectrofotómetro a 580nm, relacionando con la curva patrón de almidón. El almidón comercial de Zea mays permitió obtener una producción de amilasas por Bacillus licheniformis FGM-A15 en forma creciente desde las 0h hasta las 72h con una tendencia logarítmica y una producción máxima de 0.0426 UA/mL a las 72h, pero que estadísticamente dichas producciones son similares en comparación con el sistema control.