Efficacy of calcein and Coomassie Blue dyeing of shell growing-edges and micro growth-bands: Ageing juvenile of Pinctada mazatlanica(Pterioida: Pteriidae)

Abstract

Age validation is the first step to determine shellfish species age determination. This information is vital for different inferential models used in marine ecosystem management activities. In spite that various validation techniques are used for marking carbon calcium structures, the calcein marking technique for oysters had never been used for age validation in Pinctada mazatlanica. Thus the objectives of this study included: the evaluation of calcein to mark a shell growing-edge, and the efficacy of Coomassie Blue staining on posterior shell growth, to produce visible micro growth-bands that would enable age validation of juvenile mother-of- pearl oysters. Oysters were collected and cultivated at The Perlas del Cortez S. de R. L. MI. pearl-farming opera-tion, in Pichilingue, La Paz Bay, Baja California Sur, Mexico; a total of 36 oysters (shell height 11.5-36.4mm) were injected with calcein (0.125g/L), and another 50 oysters (shell height 14.8-42.7mm) were submersed in calcein (0.4 and 0.7g/L). Shell slices of calcein-marked oysters were posteriorly stained with Coomassie Blue R-25 for micro growth-band recognition. Our results showed that Calcein marking only worked by submersion and produced a concise bright lime-green florescent band along the growing-edge with clear boundaries for both concentrations. However, marks resulted better at the lower calcein concentration (0.4g/L) with more “perfect” and “good” marks on the growing-edge (p=0.0012). Commassie Blue staining technique was successful, and allowed to conclude that one micro growth-band was laid down per day, similar to other oyster species. Mean 15-d increase of shell growth height was slightly greater at the lower calcein concentration (=0.735mm) than at the higher one (=0.577mm) (not significant difference, p=0.198). Calcein marking of shell growing-edges and Commassie Blue staining of posterior shell growth, as a method for age validation is recommended for shellfish shell growth-band counts. This will allow back-dating for estimation of very precise colonization dates, both spatially and temporally in future work. Rev. Biol. Trop. 62(3):957-968. Epub 2014 September 01.

La validación de la edad es el primer paso para determinar la determinación de la edad de las especies de mariscos. Esta información es vital para diferentes modelos inferenciales utilizados en las actividades de gestión de ecosistemas marinos. A pesar de que se utilizan diversas técnicas de validación para el marcado de estructuras de calcio-carbono, la técnica de marcado de calceína para ostras nunca se había utilizado para la validación de la edad en Pinctada mazatlanica. Por lo tanto, los objetivos de este estudio incluyeron: la evaluación de la calceína para marcar el borde de crecimiento de una concha, y la eficacia de la tinción con azul de Coomassie en el crecimiento posterior de la concha, para producir microbandas de crecimiento visibles que permitirían la validación de la edad de madres juveniles. ostras de perlas Las ostras fueron colectadas y cultivadas en Las Perlas del Cortez S. de R. L. MI. operación de cultivo de perlas, en Pichilingue, Bahía de La Paz, Baja California Sur, México; a un total de 36 ostras (altura de la concha 11,5-36,4 mm) se les inyectó calceína (0,125 g/l), y otras 50 ostras (altura de la concha 14,8-42,7 mm) se sumergieron en calceína (0,4 y 0,7 g/l). Cortes de conchas de ostras marcadas con calceína se tiñeron posteriormente con Coomassie Blue R-25 para el reconocimiento de microbandas de crecimiento. Nuestros resultados mostraron que el marcado con calceína solo funcionó por inmersión y produjo una banda fluorescente de color verde lima brillante concisa a lo largo del borde de crecimiento con límites claros para ambas concentraciones. Sin embargo, las marcas resultaron mejores con la concentración más baja de calceína (0,4 g/L) con más marcas "perfectas" y "buenas" en el borde de crecimiento (p=0,0012). La técnica de tinción con Commassie Blue fue exitosa y permitió concluir que se establecía una microbanda de crecimiento por día, similar a otras especies de ostras. El aumento medio de 15 días de la altura de crecimiento de la concha fue ligeramente mayor con la concentración de calceína más baja (= 0,735 mm) que con la más alta (= 0,577 mm) (diferencia no significativa, p = 0,198). Se recomienda el marcado con calceína de los bordes de crecimiento de la concha y la tinción con azul de Commassie del crecimiento de la concha posterior, como método para la validación de la edad, para el recuento de bandas de crecimiento de la concha de los mariscos. Esto permitirá retroceder para la estimación de fechas de colonización muy precisas, tanto espacial como temporalmente en trabajos futuros. Rev. Biol. trop. 62(3):957-968. Epub 2014 01 de septiembre.