Efecto inhibitorio de biopelículas de Pseudomonas fluorescens FF48 en la formación de biopelículas de Flavobacterium psychrophilum.

Abstract

Flavobacterium psychrophilum, es una bacteria Gram negativa aerobia, y es el agente etiológico de la “Enfermedad de las aguas frías” que afecta a los salmónidos. Esta especie bacteriana han sido considerada uno de los patógenos de salmónidos más importantes a nivel mundial debido a las pérdidas económicas causadas a esta industria. El control de esta enfermedad se basa principalmente en el uso de antibióticos. Sin embargo, la resistencia mostrada por cepas de F. psychrophilum, y el hecho que estos compuestos no tienen el mismo efecto en biopelículas de este patógeno, ha incrementado el interés por alternativas basadas en el control biológico, explotando el antagonismo que ejercen determinados microorganismos, especialmente del género Pseudomonas contra F. psychrophilum. Por lo cual, en este trabajo se estudió la formación de biopelículas de F. psychrophilum en el sistema estándar de formación de biopelículas CDC biofilm reactor, en presencia de biopelículas de la cepa antagónica de crecimiento Pseudomonas fluorescens FF48. Se trabajó con la bacteria aislada desde piscicultura P. fluorescens FF48, a la cual se le evaluó la actividad antagónica de su sobrenadante contra el crecimiento planctónico de F. psychrophilum. Además se determinó la influencia del hierro III en la actividad antagónica del sobrenadante, adicionando al medio de cultivo 200 µM de FeCl3. Posteriormente se evalúo la formación de biopelículas de F. psychrophilum en distintos materiales (acero inoxidable, poliestireno, poliuretano y policarbonato) mediante microscopía de epifluorescencia con tinción DAPI y visualización por microscopía electrónica de barrido y confocal, y se realizaron curvas de formación de biopelícula mixta antagonista-patógeno en distintas condiciones de cultivo, sobre soporte de acero inoxidable en el reactor. La cuantificación de cada especie se realizó mediante qPCR. El sobrenadante de P. fluorescens FF48 mostró una inhibición en el crecimiento de F. psychrophilum aún diluido 8 veces, y al adicionar FeCl3 al medio de cultivo no se observó actividad inhibitoria. El soporte que mostró mayor formación de biopelículas de F. psychrophilum fue el acero inoxidable. En el ensayo de biopelículas mixtas, se observó la inhibición completa de la formación de biopelículas de F. psychrophilum cuando el antagonista fue depositado previamente, pero al inocular ambas bacterias simultáneamente, se observó solamente un retardo en la formación de biopelículas del patógeno. La bacteria antagonista es capaz de inhibir la fase planctónica de F. psychrophilum mediante compuestos con alta afinidad al hierro y además la formación de biopelículas cuando el antagonista es depositado previamente como una biopelícula sobre el soporte. Los resultados de este trabajo sugieren el potencial uso de la cepa P. fluorescens FF48 como un biocontrolador de F. psychrophilum, mediante la formación de biopelículas en sistemas de cultivos de peces, favoreciendo la liberación de compuestos antagónicos en el medio y previniendo la formación de biopelículas del patógeno.