O método analítico por espectrofotometria no ultravioleta foi desenvolvido e validado, segundo as normas vigentes das agências regulatórias, para a quantificação de metronidazol gel vaginal. Utilizou-se N-N-dimetilformamida para extração do metronidazol a partir da forma farmacêutica e o comprimento de onda utilizado foi de 308 nm. O método desenvolvido, de acordo com o tratamento estatístico dos resultados demonstrou ser preciso, exato, seletivo, robusto e linear, constituindo-se uma alternativa confiável e eficiente e de baixo custo para a determinação de metronidazol gel vaginal na rotina laboratorial.The analytical method of spectrophotometry by UV for the assay of metronidazole vaginal gel was developed and validated following all the requirements of the regulatories agencies. N-N-dimethylformamide was used for the extraction of metronidazole from pharmaceutical form and the wavelength used was 308 nm. The developed method, in accordance with the statistical treatment of the results demonstrated being precise, accurate, selective, robust and linear, consisting a trustworthy and efficient analytical alternative with low cost for determination of metronidazole vaginal gel in the laboratorial routine.