Dimetilsulfóxido (DMSO) é um solvente amplamente utilizado para diluir ou incorporar componentes ou misturas em meios aquosos para ensaios biológicos in vitro. Neste trabalho, seus efeitos sobre a proliferação de linfócitos humanos foram avaliados observando-se a multiplicação celular por citometria de fluxo, análise morfológica em citocentrifugados corados e quantificação de AgNOR. Células mononucleares de sangue periférico humano foram induzidas a proliferar por fitohemaglutinina na presença de DMSO (150-300mM), por 5 dias a 37°C e 5% de CO2. Observou-se que o DMSO inibiu significativamente, proporcional à concentração, a proliferação de linfócitos. A morfologia celular mostrou predominância de linfócitos nas culturas tratadas com DMSO, enquanto baixos números de AgNORs, que são segmentos de DNA que transcrevem RNA ribossomal, foram encontrados. Estes resultados demonstram que o DMSO é um solvente inapropriado para estudos biológicos que envolvam imunomodulação de linfócitos humanos.Dimethylsulfoxide (DMSO) is a solvent widely used for diluting or including compounds or mixtures for in vitro biological assays. In this work, the effects of DMSO on human lymphocytes proliferation were evaluated through cell multiplication in a flow cytometer, morphological analyses on stained smears, and AgNOR quantification. Human peripheral blood mononuclear cells induced to proliferate by phytohemagglutinin were treated with DMSO (150- 300mM) for 5 days at 37 °C, and 5% CO2. DMSO inhibited significantly the lymphocyte proliferation in a dosedependent manner. Lymphocyte morphology predominated in DMSO-treated cultures while low numbers of Ag- NOR, which are DNA segments that transcribe ribosomal RNA, were found. The results showed that DMSO is not appropriate for using as a solvent for biological assays involving human lymphocytes immunomodulation.