Este estudo apresenta uma nova metodologia analítica por cromatografia líquida de alta eficiencia (CLAE) para a determinação quantitativa da dexametasona em matéria-prima e comprimidos, visando a uniformização de metodologias em laboratórios de controle da qualidade. O método foi validado segundo as características de linearidade, faixa de concentração, exatição, precição e especificidade. A nova metodologia analítica apresentou-se linear (r = 0,9994), precisa (CV = 0,03 - 1,74%) e exata (5% da concentração teórica), dentro da faixa de concentração estudada (20,0-30,0 µg/mL). Assim, o método analítico desenvolvido demonstrou-se útil para a quantificação da dexametasona em matéria-prima e comprimidos, podendo ser facilmente incorporado as análises de rotina em laboratórios de controle da qualidade de medicamentos.This work shows a new analytical method by high performance liquid chromatography (HPLC) for quantitative determination of dexamethasone in raw material and tablets, with the purpose to uniformize methodologies in quality control laboratories. The method was validated with regard to linearity, range, accuracy, precision and specificity. These new method was linear (r = 0.9994), precise (R.S.D = 0.03 - 1.74%) and accurate (5% of the nominal concentration), within the specific range (20.0 - 30.0 pg/mL). Therefore, this method can be useful for quantification of dexamethasone in raw material and tablets and easily employed for the routine analyses in drug quality control laboratories.