Trabajo de grado - Pregrado
Comparación de dos diluyentes para la criopreservación de semen ovino
Autor
Buitrago Peña, Johanna Marcela
Pérez Sánchez, Luz Marina
Institución
Resumen
<p>El presente proyecto consistió en establecer cuál de los diluyentes Salamon o Colas, es el mejor para conservación de semen ovino en nuestro medio, mediante la obtención, evaluación, y criopreservación de semen, y posterior evaluación post descongelación. Asimismo, buscó estandarizar las técnicas requeridas para los procedimientos mencionados. Para la realización de este trabajo se utilizaron machos puros que presentaban un buen estado general y un fenotipo de acuerdo con la raza, a los que se les realizó examen andrológico y se confirmó que se encontraban aptos para la reproducción. Semanalmente se obtuvieron eyaculados que se evaluaron y clasificaron cumpliendo los parámetros espermáticos en cuanto a motilidad 80%, morfología normal 80%, concentración 4 billones por mililitro y vigor (movimiento progresivo, rápido y enérgico del espermatozoide) (Mobini 2002, Aisen 2004). Una vez evaluados los eyaculados fueron diluídos y fraccionados para ser empacados en pajillas de 0.25 ml a una concentración de 80 millones de espermatozoides móviles (Colas, 1975) Se utilizaron los diluyentes de Salamon y Colas, los que han sido usados y reportados con excelentes resultados en criopreservación de semen ovino en diferentes investigaciones a nivel internacional (Fernández-Abella, 1995 y 2005; Evans, Maxwell, 1990). Mientras que a nivel nacional no se reporta su uso hasta la fecha. Para la preparación de los diluyentes se utilizó yema de huevo fresca y yema de huevo pasteurizada en polvo, lo que garantiza disminución en el riesgo de contaminación microbiológica debido a que es deshidratada a 40 C y pasteurizada a 200 C. La evaluación de la calidad de los diluyentes se llevó a cabo mediante evaluación de la motilidad del semen en tres momentos diferentes: pre-refrigeración diluido a 30 °C, posrefrigeración diluido a 5 °C y 48 horas pos-descongelación. Así como también se realizó la coloración de la triple tinción de Tripán a muestras frescas y descongeladas, en la que se pudo observar al mismo tiempo integridad acrosómica, morfología y diferenciación de espermatozoides vivos y muertos (Cortés, 1997) Durante la toma de muestras se crearon protocolos y formatos de evaluación para así controlar cada uno de los procesos. Por último se realizaron análisis estadísticos, utilizando un modelo de bloques completamente al azar (BCA) y se efectuó una prueba de Tukey para evaluar las diferencias de medias; se muestra también estadística descriptiva respecto a las características de los eyaculados de los carneros.</p> The present project consisted to establish which of the thinner Salamon or Colas, is the best for conservation of ram semen in our environment, through collection, evaluation, and cryopreservation of sperm, and evaluation post-defrost. It also sought to standardize the techniques required for the mentioned procedures. For the accomplishment of this work pure males were used who presented a good general state and a phenotype in agreement with the race, which was performed andrologist review and confirmed that they were suitable for reproduction. Weekly ejaculated were obtained which were evaluated and classified by meeting the benchmarks in terms of sperm motility 80% normal morphology 80% concentration 4 billion per milliliter and Vigor (progressive movement, fast and energic of the spermatozoon) (Mobini 2002, Aisen 2004). After examining the ejaculate were diluted and split to be packed in straws of 0.25 ml at a concentration of 80 million sperm (Colas, 1975) We used the extenders of Salamon and Colas, which have been used and reported excellent results in cryopreservation of sperm sheep in various investigations at the international level (Fernandez-Abella, 1995 and 2005; Evans, Maxwell, 1990). While at the national level are not reported its use to date. For the preparation of extenders was used fresh egg yolk and pasteurized egg yolk powder, which ensures reduction in the risk of microbiological contamination because it is dehydrated to 40ºC and pasteurized at 200ºC. The evaluation of the quality of extenders was conducted by evaluation the motility of sperm in three different times: diluted pre-refrigeration to 30 °C, diluted pos-refrigeration to 5 °C and 48 hours pos-defrost. And also saw the Triple-Stain Technique to sample fresh and thawed, which was seen at the same time acrosomal integrity, sperm morphology and differentiation of living and the dead sperm (Cortes, 1997.) During the sampling were set up protocols and formats for assessment and control each process. Finally statistical analysis was performed using a one way random with analysis of variance, and was made a Tukey test to assess mean differences; also shows descriptive statistics regarding the characteristics of the ejaculate of rams.