Modelo de deleção osteoblasto-especifica do gene da conexina 43 em camundongos

Abstract

Os osteoblastos sao altamente acoplados por juncoes gap formadas pela conexina 43 (Cx43). Disturbios da expressao ou funcao da Cx43 in vitro alteram a expressao genica nos osteoblastos, enquanto a defiCiência genetica da Cx43 in vivo causa letalidade perinatal, defeitos do desenvolvimento do esqueleto craniofacial e disfuncao autonoma do osteoblasto. Para determinar o papel da Cx43 no pico de massa ossea e na manutencao da homeostase mineral no esqueleto adulto, nos desenvolvemos um modelo animal (camundongo) de delecao do gene da Cx43 seletivamente em osteoblastos (knock-out condicional), usando o sistema Cre/IOxP, de modo a evitar a letalidade perinatal associada a estrategia convencional de delecao do gene da Cx43 (knock-out convencional). Nesse modelo condicional, a recombinase Cre catalisa um evento de recombinacao genica que resulta na substituicao da regiao codificadora do gene da Cx43 por um cassete codificador da (3-galactosidase, LacZ. Uma linhagem de camundongos portadores da mutacao floxed do alelo da Cx43 (Cx43fl) foi gerada na qual a regiao codificadora do gene da Cx43 e flanqueada por dois sitios P's (IoxP). Camundongos homozigotos para a mutacao floxed (Cx43fl/fl) foram cruzados com camundongos com expressao transgenica da recombinase Cre sob controle do fragmento de 2.3 Kb do promotor do gene do colageno tipo I e heterozigotos para a mutacao nula convencional da Cx43 (Cola([)-Cre;Cx43+/-). Dessa forma, camundongos knockout condicional da Cx43 (Col(I)-Cre;Cx43-/fl) e seus respectivos controles (Cx43+/fl, Col(I)-Cre;Cx43+fl e Cx43-/fl) foram gerados em numerosa(au)