Expressão gênica de neurotrofinas e receptores em quelóide

Abstract

Introduction: The resulting fibrosis in the healing process can be steeper than usual forming hyperproliferative skin scarring such as hypertrophic scar and keloid, which latter is unique to humans. Both scars have more nerve fiber endings, compared to normal skin, suggesting that neuropeptides and neurotrophins were involved in generating, maintaining and postoperative recurrence of these scars. Objective: To evaluate the expression of 84 genes related to neurotrophins and receptors in keloid. Methods: Were collected twelve (12) samples of keloid in keloid group and twelve (12) normal skin samples in the control group. Total RNA was purified with Qiagen RNeasy Minikit DNAse and the quantity and quality of the extracted RNA were assessed by spectrophotometry. The mRNA was used for cDNA synthesis. The reverse transcription reactions were carried out using the First Strand Kit RT2 Superarray Bioscience, according to the manufacturer's protocol and RT-qPCR was performed using the PCR RT2 Profiler® Superarray Bioscience array 84 where relevant human genes involved were analyzed the neurotrophin synthesis and their receptors - Human neurotrophins & receptors PCR Array (PAHS-031Z). Results: Twelve (12/84 or 14%) genes - HSPB1, GRPR, CRHR2, NPY2R, 1L6ST, NGF, MT3, BCL2, CCKAR, PSPN, GalR2 and FRS3 were differentially expressed in keloid. Conclusion: The differentially expressed genes, 100% hypo-expressed in keloid compared to normal skin, and priority genes are HSPB1, GRPR, CRHR2, NGF, MT3 and BCL2.

Introdução: A fibrose resultante do processo de cicatrização pode ser mais acentuada que o normal formando cicatriz hiperproliferativa na pele, tal como cicatriz hipertrófica e queloide, das quais esta última é exclusiva dos seres humanos. Ambas as cicatrizes apresentam maior número de fibras nervosas, se comparadas à pele normal, sugerindo que neurotrofinas e neuropeptídeos estariam envolvidos na origem, manutenção e recidiva pós-operatória dessas cicatrizes. Objetivo: Avaliar a expressão de 84 genes relacionados às neurotrofinas e receptores em queloide. Métodos: Foram coletadas doze (12) amostras de queloide no grupo queloide e doze (12) amostras de pele normal no grupo controle. O RNA total foi purificado com Qiagen RNeasy Minikit de DNAse e a quantidade e a qualidade do RNA extraído foram avaliadas por espectrofotometria. O mRNA foi usado para a síntese de cDNA. As reações de transcrição reversa foram realizadas usando o RT2 First Strand Kit da Superarray Bioscience, de acordo com o protocolo do fabricante e a RT-qPCR foi realizada usando o RT2 Profiler® PCR array da Superarray Bioscience, onde foram analisados 84 genes humanos relevantes envolvidos na síntese de neurotrofinas e seus respectivos receptores ? Human Neurotrophins & Receptors PCR Array (PAHS-031Z). Resultados: Doze (12/84 ou 14%) genes - HSPB1, GRPR, CRHR2, NPY2R, 1L6ST, NGF, MT3, BCL2, CCKAR, PSPN, GALR2 e FRS3 foram diferencialmente expressos no queloide. Conclusão: Os genes diferencialmente expressos, 100% hipoexpressos, em queloide comparado à pele normal, e os genes prioritários são HSPB1, GRPR, CRHR2, NGF, MT3 e BCL2.