masterThesis
Associação de polimorfismos, níveis séricos e parâmetros clínicolaboratoriais da galectina-3 em pacientes com esclerose sistêmica
Autor
CUNHA, Eudes Gustavo Constantino
Institución
Resumen
A esclerose sistêmica (ES) é uma doença autoimune complexa caracterizada pela vasculopatia, desregulação imunológica e fibrose. Altos índices de morbidade e mortalidade estão associados à ES, principalmente devido ao acometimento fibrótico de pele e órgãos internos. A etiopatogênese da ES não é bem elucidada, porém acredita-se que fatores ambientais ligados à carga genética possam desencadear a doença. A galectina-3 é a única lectina do tipo quimera pertencente ao grupo das galectinas, que pesa cerca de 30kDa e possui afinidade por ligantes β- galactosídeos. Codificada pelo gene LGALS3, a Gal-3 possui atividade conhecida em processos biológicos fundamentais, na auto-tolerância, inflamação e fibrose. Devido às funções pró-fibróticas da Gal-3, este trabalho buscou avaliar a possível associação de polimorfismos no gene LGALS3 com níveis séricos de Gal-3 e manifestações clínicas em pacientes com ES. Um estudo caso-controle foi realizado com 88 pacientes e 151 controles pareados por sexo e idade. O DNA genômico foi extraído de sangue total pela técnica do fenol-clorofórmio e então os polimorfismos de base única (SNP) LGALS3 rs4652 (+292) A>C, rs1009977 G>T e o rs2075601 C>T foram analisados por PCR em tempo real, utilizando sondas alelo específicas Taqman®. As amostras de soro foram dosadas por ELISA sanduíche. Os valores estatísticos foram significantes quando p<0,05. Os resultados obtidos revelam que o LGALS3 rs4652 não está associado com a doença. Entretanto, as frequências alélicas e genotípicas dos SNPs intrônicos LGALS3 rs1009977 e rs2075601 revelaram que os genótipos heterozigotos rs1009977 (G/T) [OR= 0,27 (0,10-0,73) IC 95%; p=0,0047] e rs2075601 (C/T) [OR= 0,30 (0,13-0,66) IC 95%; p=0,001], assim como o modelo dominante de ambos LGALS3 rs1009977 (G/T + T/T) [OR= 0,37(0,14-0,98) IC 95%; p=0,0307] e LGALS3 rs2075601 (C/T + T/T) [OR=0,33 (0,14-0,74) IC 95%; p=0,004] podem estar associados com proteção à doença. Os níveis da Gal-3 estavam alterados em relação ao genótipo polimórfico (C/C) do LGALS3 rs4652 em pacientes (p=0,0382) e controles (p=0,0051). Adicionalmente, o modelo dominante (A/C + C/C) do LGALS3 rs4652 também apresentou menores níveis séricos da Gal-3 em controles (p=0,0174). Assim, foi observado que o genótipo polimórfico (C/C) do LGALS3 rs4652 pode causar uma diminuição dos níveis de Gal-3 na população geral do estudo, embora nenhuma correlação direta com a doença foi encontrada. Paralelamente, o LGALS3 rs1009977 apresentou um aumento da Gal-3 no modelo dominante em relação ao genótipo selvagem, porém essa variação foi observada apenas no grupo controle (p=0,0115). O LGALS3 rs2075601 não mostrou variações estatisticamente significantes na comparação com os níveis da Gal-3. Os níveis de Gal-3 sérica não diferiram entre pacientes e controles, bem como associações da Gal-3 com manifestações clínicas da doença não foram encontradas. Contudo, observou-se que os pacientes que faziam uso de glicocorticoides apresentaram maiores níveis de Gal-3 do que os que não se submeteram a esse tratamento. Nosso estudo foi importante para a avaliação genética e sérica da Gal-3 em pacientes com ES, contudo novos estudos são necessários para melhor elucidar os mecanismos envolvidos na relação dos polimorfismos do LGASL3 com a ES. CAPES CNPq Systemic sclerosis (SSc) is a complex autoimmune disease characterized by vasculopathy, immune dysregulation and fibrosis. High morbidity and mortality rates are associated with SSc, mainly due to fibrotic involvement of skin and internal organs. The etiopathogenesis of SSc is not well elucidated, but it is believed that environmental factors linked to genetic burden can trigger the disease. Galectin-3 is the only chimeric-like belonging to the galectin group, which weighs about 30 kDa and has affinity for β-galactosides binders. Encoded by the LGALS3 gene, Gal-3 has known activity in fundamental biological processes, in self-tolerance, inflammation and fibrosis. Due to the pro-fibrotic functions of Gal-3, this work aimed to evaluate the possible association of polymorphisms in the LGALS3 gene with serum levels of Gal- 3 and clinical manifestations in SSc patients. A case-control study was performed with 88 patients and 151 matched controls by sex and age. Genomic DNA was extracted from whole blood by the phenol-chloroform technique and then the singlebase polymorphisms (SNP) LGALS3 rs4652 (+292) A>C, rs1009977 G>T and rs2075601 C>T were analyzed by real time-PCR, using Taqman® specific allele probes. Serum samples were dosed by sandwich ELISA assay. Statistical values were significant when p < 0.05. The results obtained reveal that LGALS3 rs4652 is not associated with the disease. However, the allelic and genotypic frequencies of LGALS3 intronic SNPs rs1009977 and rs2075601 revealed that heterozygous genotypes rs1009977 (G/T) [OR = 0.27 (0.10 - 0.73) 95% CI; p = 0.0047] and rs2075601 (C/T) [OR = 0.30 (0.13 - 0.66) 95% CI; p = 0.001], as well as the dominant model of both LGALS3 rs1009977 (G/T + T/T) [OR = 0.37 (0.14 - 0.98) 95% CI; p = 0.0307] and LGALS3 rs2075601 (C/T + T/T) [OR = 0.33 (0.14 - 0.74) 95% CI; p = 0.004] may be associated with disease protection. Gal-3 levels were altered regarding the LGALS3 rs4652 polymorphic genotype (C/C) in SSc patients (p = 0.0382) and controls (p = 0.0051). In addition, the dominant model (A/C + C/C) of LGALS3 rs4652 also presented lower Gal-3 levels in controls (p = 0.0174). Thus, it was observed that the LGALS3 rs4652 polymorphic genotype (C/C) may cause a decrease in Gal-3 levels in general population of the study, although no direct correlation with the disease was found. In parallel, LGALS3 rs1009977 showed an increase in Gal-3 for dominant model in relation to the wild genotype, but this variation was observed only in the control group (p = 0.0115). LGALS3 rs2075601 did not show statistically significant variations when compared to Gal-3 levels. Serum levels of Gal-3 did not differ between patients and controls, as well as Gal-3 associations with clinical manifestations of the disease were not found. Nevertheless, it was observed that patients taking glucocorticoids had higher levels of Gal-3 than those who did not undergo this treatment. Our study was important for genetic and serum evaluation of Gal-3 in SSc patients, however, new studies are needed to better elucidate the mechanisms involved in the relationship of the LGASL3 polymorphisms with SSc.